【摘 要】
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旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒Ⅰ型(canine adenovirus type Ⅰ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的 片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1019 bp(CAV-Ⅱ).分别提取CPV、CAV-
【机 构】
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青岛农业大学动物医学院,山东青岛266109;中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室,北京100193;中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室,北京100193
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旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒Ⅰ型(canine adenovirus type Ⅰ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的 片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1019 bp(CAV-Ⅱ).分别提取CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ细胞培养物的DNA,进行三联PCR扩增试验.结果 表明,所建立的单项PCR及二联PCR扩增良好,其产物经测序比对与引物扩增序列完全一致.在此基础上,优化三联PCR扩增试验条件,成功建立了可同时检测CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的三联PCR诊断方法.并对其特异性和灵敏度进行检测,三联PCR最低检测限度为0.16 pg总DNA,而对犬副流感病毒和犬瘟热病毒的PCR检测结果均为阴性.对送检的20份病料进行检测,结果显示15份为CPV阳性,5份为CAV-Ⅰ阳性,1份为CAV-Ⅱ阳性.
其他文献
取本实验室前期分离鉴定的1株非致病性血清1型禽腺病毒(FAdV-1)JS2017株,在LMH细胞扩大培养后提取病毒全基因组DNA,PCR分别扩增基因组左端1186 bp和右端1130 bp序列作为同源臂并克隆进质粒SuperCos-1内,成功构建了质粒pCos-UD.质粒pCos-UD线性化后与病毒全基因组DNA共转化入大肠杆菌BJ5183内,通过同源序列间发生同源重组,将完整病毒基因组DNA插入质粒载体中成功构建感染性克隆pCos-FAdV1.分别针对病毒基因组不同部位设计引物进行PCR检测,同时配合限
在城市生活中,交通问题是关系社会民生的重要问题。交通拥堵表现尤为突出,尤其在通勤高峰期,拥堵严重不仅影响正常的生产生活,更会影响市民的安全感、获得感和幸福感。智能交通系统的提出在缓解交通拥堵问题上提供了有效治理思路,通过交通流的有效预测能够为系统核心技术提供数据参考,故本文主要研究内容是交通流的预测。交通流预测在数据获取和预测模型两方面都会影响预测的效果。首先在数据获取方面,使用改进后的维特比算法