【摘 要】
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旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒Ⅰ型(canine adenovirus type Ⅰ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的 片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1019 bp(CAV-Ⅱ).分别提取CPV、CAV-
【机 构】
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青岛农业大学动物医学院,山东青岛266109;中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室,北京100193;中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室,北京100193
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旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒Ⅰ型(canine adenovirus type Ⅰ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的 片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1019 bp(CAV-Ⅱ).分别提取CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ细胞培养物的DNA,进行三联PCR扩增试验.结果 表明,所建立的单项PCR及二联PCR扩增良好,其产物经测序比对与引物扩增序列完全一致.在此基础上,优化三联PCR扩增试验条件,成功建立了可同时检测CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的三联PCR诊断方法.并对其特异性和灵敏度进行检测,三联PCR最低检测限度为0.16 pg总DNA,而对犬副流感病毒和犬瘟热病毒的PCR检测结果均为阴性.对送检的20份病料进行检测,结果显示15份为CPV阳性,5份为CAV-Ⅰ阳性,1份为CAV-Ⅱ阳性.
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