【摘 要】
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目的 为改进拟胚体制备过程中分化不同步等问题,探讨建立小鼠胚胎干细胞贴壁制备拟胚体的新方法.方法 沈阳军区总医院心内科于2004年10月至2006年1月对小鼠进行研究,当小鼠胚
【机 构】
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沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科
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目的 为改进拟胚体制备过程中分化不同步等问题,探讨建立小鼠胚胎干细胞贴壁制备拟胚体的新方法.方法 沈阳军区总医院心内科于2004年10月至2006年1月对小鼠进行研究,当小鼠胚胎干细胞R1生长至70%～80%亚融合时,将其消化成单细胞,以1×106的细胞数接种到直径100 mm组织培养皿中,用含低浓度白血病抑制因子(LIF)1 μg/L的胚胎干细胞培养液连续贴壁培养3 d后,收集贴壁细胞团继续悬浮培养.对悬浮培养的拟胚体及其冰冻切片行形态学观察,对悬浮及贴壁分化的拟胚体行甲胎蛋白(AFP)、血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)及神经丝蛋白68 KD(NF-68)免疫荧光染色.结果 形态学观察用本法得到的拟胚体大小均一,分化同步,能展示从简单拟胚体到成熟囊性拟胚体的典型发育过程.免疫荧光染色显示,AFP、PECAM-1及NF-68三种标志物表达均为阳性.结论 与传统方法相比,该法操作简便、拟胚体形成率高、分化阶段同步,具有分化为3个胚层来源细胞的能力,可作为胚胎早期发育和胚胎干细胞分化等研究的理想工具.
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