【摘 要】
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目的 研究假性激酶蛋白3 (Tribbles homology protein3,TRIB3)与蛋白激酶B(Protein kinaseB,AKT)在大鼠睾丸细胞中是否存在相互作用关系.方法 普通PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定.利用大鼠睾丸组织培养细胞通过RT-qPCR对Trib3的表达进行检测验证,对照组为野生型大鼠睾丸细胞,实验组为Tri63基因敲除大鼠睾丸细胞,运用Western blot和RT-qPCR检测两组共培养细胞中AKT蛋白和Akt mRNA的表达.利用两步酶消法消化野生型大鼠睾丸细胞,提
【机 构】
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内蒙古医科大学基础医学院内蒙古医科大学附属医院 110032
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目的 研究假性激酶蛋白3 (Tribbles homology protein3,TRIB3)与蛋白激酶B(Protein kinaseB,AKT)在大鼠睾丸细胞中是否存在相互作用关系.方法 普通PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定.利用大鼠睾丸组织培养细胞通过RT-qPCR对Trib3的表达进行检测验证,对照组为野生型大鼠睾丸细胞,实验组为Tri63基因敲除大鼠睾丸细胞,运用Western blot和RT-qPCR检测两组共培养细胞中AKT蛋白和Akt mRNA的表达.利用两步酶消法消化野生型大鼠睾丸细胞,提取总蛋白,运用免疫共沉淀来验证TRIB3与AKT的蛋白互作关系.结果 实验所用大鼠为Trib3基因敲除鼠,Trib3 mRNA在实验组无表达(P＜0.05),实验组较对照组AKT蛋白(P＜0.05)和Akt mRNA表达升高(P＜0.01).TRIB3抗体免疫沉淀的蛋白复合物中检测到AKT,同时AKT抗体免疫沉淀的蛋白复合物中也检测到TRIB3.结论 TRIB3和AKT在大鼠睾丸细胞中存在相互作用.
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