目的 构建一种灵敏、特异、快速的实时荧光定量RT—PCR反应体系用于临床H7N9禽流感疑似病例早期诊断及外环境H7N9病毒的监测。方法以H7N9禽流感病毒H7基因和N9基因为靶基因设计引物以及TaqMan探针，并对引物、探针及反应条件进行优化，验证该反应体系检测的特异性、灵敏度、重复性和检测速度，然后与两种商品化试剂盒（试剂盒I和试剂盒Ⅱ）进行各项指标及184份现场样本作平行比对。结果新建立的H7N9禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR反应体系呈典型的扩增曲线、扩增时间约50min，H7基因与N9基因的最低检出限分别为28拷贝／μL与41拷贝／μL。重复性测定显示，H7和N9检测Ct值的变异系数（CV）分别为0．17％～0．89％和0．33％～0．59％，扩增效率分别为0．9491和0．9713；与其他常见禽流感病毒或肠道病毒无明显交叉反应。184份现场可疑样本阳性检出率为5．43％（10／184），与试剂盒Ⅱ结果一致。结论本研究建立的实时荧光定量RT—PCR反应体系具有检测速度快、灵敏度高、特异性强、重复性好、结果可靠等特点，可用于临床疑似病例的应急检测、早期诊断及养鸡场、活禽交易市场等外环境H7N9禽流感病毒监测。