【摘 要】
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以青海‘蕨麻4号’诱导培养的愈伤组织为材料,采用4因素3水平L9(34)正交实验,研究酶类组合、酶解时间、甘露醇浓度及离心速度等主要因素对蕨麻原生质体分离的影响,建立高效、
【机 构】
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青海民族大学青藏高原蕨麻研究中心,青海省生物技术与分析测试重点实验室,青海民族大学生态环境与资源学院
【基金项目】
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科技部农业科技成果转化基金(2010GB2G00514);国家自然科学基金(31660425,30607026,30660019);青海省自然科学基金(2012-Z-907);青海民族大学大学生创新创业训练计划(DCXM-2016-023)
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以青海‘蕨麻4号’诱导培养的愈伤组织为材料,采用4因素3水平L9(34)正交实验,研究酶类组合、酶解时间、甘露醇浓度及离心速度等主要因素对蕨麻原生质体分离的影响,建立高效、稳定的蕨麻原生质体分离体系,为进一步通过原生质体融合、基因工程等方法对蕨麻进行品种改良奠定基础。结果表明:各因素对蕨麻原生质体产量的影响顺序为:酶类组合>酶解时间>甘露醇浓度>离心速度;青海‘蕨麻4号’愈伤组织原生质体的最适酶解条件为:2.0%纤维素酶+0.75%果胶酶,40r/min振荡酶解10h,甘露醇浓度为0.5mol/L,离心转速为1 000r/min时原生质体的产量达最大(8.96×10~5 cells/g),活力为92.77%。
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