【摘 要】
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为了构建羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L,探讨制备安全可靠羊口疮病毒核酸双基因疫苗的可行性,试验通过Primer Premier 5.0软件设计B2L和F1L融合基因2
【机 构】
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贵州大学动物科学学院; 贵州省动物疫病研究所; 贵州威宁自治县草地畜牧业发展中心;
【基金项目】
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贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2018]2264);贵州省科学技术基金项目(黔科合LH字[2014]7667);贵州省动物疫病防控与兽医公共卫生保障科技创新人才团队项目(黔科合人才团队[2015]4016号);贵州大学2017年大学生创新创业训练计划项目(贵大(省)创字2017[002]);贵州大学2016年大学生“SRT计划”项目(贵大SRT字[2016]186号)
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为了构建羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L,探讨制备安全可靠羊口疮病毒核酸双基因疫苗的可行性,试验通过Primer Premier 5.0软件设计B2L和F1L融合基因2对引物,应用SOE-PCR技术将B2L和F1L连接起来,用限制性内切酶消化后插入pVAX1真核表达载体中,构建B2L-F1L融合基因表达质粒,再转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,对真核表达质粒进行PCR鉴定、双酶切鉴定及序列测定。结果表明:利用SOE-PCR技术成功扩增出B2L-F1L融合基因;对真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L进行PCR鉴定和双酶切鉴定后,均可得到与预期大小一致的DNA片段;测序发现,真核表达质粒目的基因序列与预期设计一致。说明真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L构建成功。
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