【摘 要】
：
[背景]副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)是猪革拉瑟氏病(Glasser's Disease)的病原体,抗生素治疗和疫苗接种对于防控该病效果不明显,建立快速、准确的抗体检测方法尤为
【机 构】
：
安徽农业大学动物科技学院 安徽合肥230036;马鞍山史记动物健康管理有限公司 安徽马鞍山238251;安徽动物疫病预防与控制中心 安徽合肥230091
论文部分内容阅读
[背景]副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)是猪革拉瑟氏病(Glasser's Disease)的病原体,抗生素治疗和疫苗接种对于防控该病效果不明显,建立快速、准确的抗体检测方法尤为重要.[目的]利用表达纯化的HPS转铁结合蛋白A(TbpA)建立检测HPS抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.[方法]PCR扩增HPS的tbpA基因并与原核表达载体pET-SUMO连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒转入Escherichia coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定产物.以纯化的TbpA蛋白作包被抗原,通过各种反应条件优化,建立检测HPS抗体的间接ELISA方法,并进行临床应用与评价.[结果]该方法的最佳条件:包被抗原浓度为5 μg/mL,4℃过夜;5％脱脂奶粉于37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶1 600,37℃孵育45 min;酶标二抗稀释度为1∶5 000,37℃作用30 min;显色时间为37℃5 min.该方法可特异性检测HPS抗体,阳性血清稀释至1∶12 800仍可检出,与其他猪病原阳性血清均无交叉反应,批内及批间变异系数均小于10％,与全菌体包被间接ELISA、商品化ELISA试剂盒及Western Blot比较,该方法总符合率分别为90.00％、86.67％和90.00％,其中阳性符合率分别为90.38％、88.46％和92.00％,阴性符合率分别为87.50％、75.00％和80.00％.该方法检测免疫抗体阳性率为80.00％,感染抗体阳性率为19.50％.[结论]基于TbpA蛋白建立的HPS抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性以及临床应用的可靠性,为HPS的免疫监测和流行病学调查提供了技术手段.
其他文献
Two cellulolytic thermophilic bacterial isolates CS-3-2 and CS-4-4 were isolated from decayed corn stalk by adding growth-supporting factors to the medium.A
近年来,随着保护地蔬菜面积的不断扩大,蔬菜灰霉病的发生危害呈逐年加重趋势,已成为番茄、黄瓜、甜椒、茄子、菜豆、西葫芦等保护地蔬菜的主要病害,对蔬菜生产造成极大的威
踌躇满志的保罗·哈维是美国一位拥有最多听众的播音员。他娴熟自如地把自己的智慧揉合在他的新闻广播之中。引人入胜的播音风格保罗·哈维主持的节目决非平铺直叙,既有关怀
【摘 要】创业能力培养教育是开发学生创业基本素质的教育，它以培养学生创业意识、创业精神，提高学生自主创业能力为目的，使毕业生不仅成为求职者，而且逐渐成为工作岗位的创造者。本文简要探讨了高校对大学生的自主创业培养、教育的意义与途经，以帮助有志的大学生积极适应社会需求。 【关键词】大学生；自主创业；创业能力培养；创业教育 在进入21世纪以来，随着我国高校的不断扩招，每年大学毕业生数量将远远超过实际
“双一流”建设将大众教育模式转变为精英培养模式,传统的大众化实践实习教学模式难以满足精细化、精英化的培养需求.当前实践实习基地建设中存在企业和高校教师参与积极性不
1985年1月14日,中国化学会第廿一届理事会第七次常务理事会议于北京举行。会议由钱人元执行理事长主持,讨论决定了以下各项工作: 一、讨论决定出席科协“三大”代表与委员候
目的 构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能.方法 以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19
产黄青霉是工业上用于发酵生产青霉素的重要真菌。作为丝状真菌,它一般通过菌丝延伸和分支进行生长,但具体的调控机制尚未完全了解。已有研究表明青霉素的分泌与菌丝延伸
毫无疑问,目前国内医药分销行业整体的趋势是集中。无论是从政策方面来看,还是从企业规模来说,都有集中的趋势,可以说,医药商业规模化、集约化趋势已经无法逆转。由此带来的