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目的
研究胆红素对人骨髓间充质干细胞(BMMSC)的作用，以期为临床选择适合采用BMMSC治疗的肝功能衰竭患者提供依据。
方法将0、10、20、30、40和50 μmol/L的胆红素分别作用于体外培养的人BMMSC。运用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测胆红素作用后BMMSC的增殖情况。采用流式细胞仪与膜联蛋白Ⅴ和碘化丙啶双标技术观察细胞凋亡率。采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)家族致凋亡蛋白和游离胱天蛋白酶-3的蛋白质表达。应用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)检测胆红素作用后BMMSC线粒体的膜电位变化。统计学方法分别采用t检验、Spearman相关检验。
结果高浓度(30、40和50 μmol/L)胆红素作用后的BMMSC增殖趋势比低浓度(10、20 μmol/L)胆红素作用后有所减弱，但同一时间点不同胆红素浓度组的吸光度(A)值两两比较比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。0、10、20、30、40和50 μmol/L胆红素作用后24 h，凋亡细胞分别占(3.20±1.20)%、(16.80±2.70)%、(19.20±4.20)%、(22.60±2.80)%、(28.40±5.20)%和(34.20±3.50)%，细胞凋亡数量与胆红素浓度之间呈正相关(r＝0.682，P＝0.032)。随着胆红素浓度的升高，Bad、Bax、Bim、BID、Bak、Bik和游离胱天蛋白酶-3的蛋白质表达量也升高。线粒体膜电位检测结果提示，随着胆红素浓度的升高，细胞从红色荧光转变为绿色荧光，提示线粒体膜电位下降。
结论胆红素可通过线粒体依赖的Bcl-2凋亡蛋白和胱天蛋白酶-3信号通路诱导BMMSC凋亡，其水平可能作为肝功能衰竭患者进行BMMSC治疗的指标之一。