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[摘要]
目的探讨桩蛋白和踝蛋白在儿童及青少年甲状腺癌组织表达及临床意义。方法
采用免疫组化法检测儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌中桩蛋白和踝蛋白的表达。结果桩蛋白和踝蛋白在儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌组织中均呈高表达，但儿童及青少年病人桩蛋白的表达明显高于成年病人（X2=3.894，P<0.05）。桩蛋白和踝蛋白在甲状腺癌中的表达与有无淋巴结转移和肿瘤浸润程度顯著相关（X2=4.181～7.479，P<0.05），而与病人性别和肿瘤组织类型无关（P>0.05）。儿童及青少年甲状腺癌的淋巴结转移率显著高于成人甲状腺癌（X2=16.272，P<0.05）。结论桩蛋白和踝蛋白在甲状腺癌组织中呈高表达，两种蛋白在甲状腺癌组织中的表达与有无淋巴结转移和肿瘤浸润程度密切相关，但儿童及青少年甲状腺癌更易发生淋巴结转移，这可为儿童及青少年甲状腺癌病人的诊疗和管理提供参考。
[关键词]甲状腺肿瘤；儿童；青少年；桩蛋白；踝蛋白；肿瘤转移
儿童及青少年甲状腺癌具有高淋巴结转移率、高复发率和低死亡率的特点，易发生局部侵袭和区域性淋巴结转移，与成人甲状腺癌相比表现出不同的生物学特点。行甲状腺全切或近全切除术、淋巴结清扫术以及术后进行I辅助治疗能够明显降低病人的远期病死率。儿童及青少年甲状腺癌死亡风险低，但复发和转移风险较高，有效的甲状腺癌肿瘤标志物检测可以规范儿童及青少年甲状腺癌的治疗、为其临床评估提供参考。最新研究表明，桩蛋白和踝蛋白两种细胞骨架蛋白在成人甲状腺癌癌细胞黏附和迁移中可能发挥重要作用。但国内外相关研究中未见儿童及青少年甲状腺癌病人桩蛋白和踝蛋白表达的报道。因此，本研究观察了桩蛋白和踝蛋白在儿童及青少年甲状腺癌中的表达，并分析其与儿童及青少年甲状腺癌侵袭和转移的关系，以期为儿童及青少年甲状腺癌病人的诊疗和管理提供一定参考。
1材料和方法
1.1标本来源
收集2002-2016年青岛大学附属医院病理科存档的甲状腺癌手术石蜡标本90例，其中儿童及青少年甲状腺癌30例，成人甲状腺癌60例。儿童及青少年甲状腺癌中，乳头状癌25例，滤泡状癌5例；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移7例；病人平均年龄14.31岁（6～18岁）。成人甲状腺癌60例均为乳头状癌；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移37例；病人平均年龄54.82岁（45～60岁）。石蜡标本以4 tim厚连续切片，4℃冰箱保存。研究获得医院伦理道德委员会的批准。
1.2实验方法
采用免疫组化SP法测定切片标本中桩蛋白和踝蛋白的表达水平。兔抗人桩蛋白和踝蛋白多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，通用型SP免疫组化超敏试剂盒和DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。按照试剂盒说明书进行操作，以PBS代替一抗作为阴性对照。
由两位技术人员采用双盲法在高倍显微镜下观察切片，每张切片随机选取3个视野计算阳性细胞数，根据细胞浆染色程度和染色细胞所占百分比进行评分，采用半定量积分法综合判断结果。
1.3统计学处理
采用SPSS19.0软件进行统计学分析，计数资料组间比较采用X2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1桩蛋白和踝蛋白在不同年龄病人甲状腺癌组织中的表达
桩蛋白和踝蛋白均阳性表达于甲状腺癌细胞的细胞膜和（或）细胞质，呈黄色、棕黄色或黄褐色。两种蛋白在儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌组织中均呈强阳性表达，但儿童及青少年病人甲状腺癌组织中桩蛋白表达明显高于成年病人，差异具有统计学意义（X2=3.894，P<0.05）。见表1。
2.2桩蛋白和踝蛋白表达与甲状腺癌生物学特征的关系
两种蛋白在甲状腺癌组织中的表达均与有无淋巴结转移和肿瘤的浸润程度显著相关（X2=4.181～7.479，P<0.05），而与病人性别和肿瘤组织类型无关（P>0.05）。见表1。
2.3儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌生物学特征的比较
儿童及青少年甲状腺癌病人的淋巴结转移率为83.33%，显著高于成人甲状腺癌的淋巴结转移率（38.33%），差异具有统计学意义（X2=16.272，P<0.05）。儿童及青少年甲状腺癌的包膜外浸润率为30.00%，成人甲状腺癌为40.00%，两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
3讨论
儿童及青少年甲状腺癌是临床上少见的头颈部恶性肿瘤，与成人甲状腺癌相比，具有更高的侵袭性，更易发生包膜外侵和局部组织的浸润。目前，儿童及青少年甲状腺癌的治疗多参考成人甲状腺癌，但由于其生物学特点与成人具有显著差异，故临床上会存在过度治疗或者治疗不足等问题。随着肿瘤研究在分子水平和蛋白水平的拓展，降钙素、降钙素基因相关肽、甲状腺球蛋白、促甲状腺激素受体等诸多肿瘤标志物的应用已经被证明在成人甲状腺癌的临床诊治中发挥重要作用。然而，目前国内外研究中却少见针对儿童及青少年甲状腺癌的肿瘤标志物，且所涉及肿瘤标志物的特异性、敏感性和准确性缺乏明确的实验证据支持。最近的生物医学研究表明，桩蛋白和踝蛋白两种细胞骨架蛋白在成人甲状腺癌癌细胞黏附和迁移中可能发挥重要作用，然而在儿童及青少年甲状腺癌中却未有相关的研究报道。
桩蛋白主要位于细胞骨架上的黏着斑，是一种相对分子质量为6.5万～7.0万的磷酸蛋白。由于桩蛋白可以与v-Src蛋白、v-Crk蛋白和BC/ABL癌性融合蛋白等多种致瘤性蛋白结合，扰乱甚至误导正常黏附和控制细胞增殖所需的生长因子信号级联，使得肿瘤细胞和非肿瘤细胞之间的相互黏附力增强，从而使肿瘤细胞更易发生迁徙和转移。研究表明，桩蛋白在成人甲状腺癌、乳癌、肺癌等恶性肿瘤基因转化过程中均表达异常，骨架蛋白上的黏着斑与癌蛋白发生激酶磷酸化，进而参与了肿瘤细胞活动。因此，桩蛋白的表达异常很有可能是肿瘤恶性转化的早期标志。本文研究结果显示，桩蛋白在儿童及青少年甲状腺癌和成人甲状腺癌组织中均呈强阳性表达，与有关文献的报道相一致。并且儿童及青少年病人桩蛋白的表达明显高于成年病人，提示桩蛋白参与了儿童及青少年甲状腺癌的发生发展过程。另外，伴有淋巴结转移和包膜外侵的甲状腺癌组织的桩蛋白表达阳性率显著高于未有淋巴结转移和包膜外侵组，提示桩蛋白可能促进了甲状腺癌细胞的淋巴结转移和侵袭活动。
踝蛋白是首个被发现的与整合素结合的细胞骨架蛋白，其相对分子质量为27.0万（包含2451个氨基酸）。研究表明，踝蛋白是成纤维细胞活化蛋白最主要的成分，连接整合素与肌动蛋白，同时连接多种黏附因子，在整合素介导的细胞黏附、迁移、增殖和整合素活化等过程中起着关键作用。相关研究表明，踝蛋白参与了成人甲状腺癌、原发性肝癌、结直肠癌、食管癌等恶性肿瘤的局部侵袭和淋巴结转移活动。本文研究结果显示，踝蛋白在成人甲状腺癌和儿童及青少年甲状腺癌组织中均呈高表达，这与有关文献报道的成人甲状腺癌踝蛋白的高表达较为一致，提示踝蛋白参与了甲状腺癌的发生和发展。另外，伴有淋巴结转移和包膜外侵的甲状腺癌组织的踝蛋白表达阳性率显著高于无淋巴结转移和包膜外侵组。上述结果提示，踝蛋白可能通过整合素、成纤维细胞活化蛋白以及其他骨架蛋白的信息传导，调节了甲状腺癌的发生、浸润和转移活动。
儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌相比，具有更高的侵袭性，更易发生包膜外侵和邻近组织的浸润，晚期甚至累及气管、喉返神经、上段食管及咽喉部组织。有研究结果显示，儿童及青少年甲状腺癌更容易发生颈部淋巴结的转移甚至远处肺转移。本文研究结果也表明，儿童及青少年甲状腺癌的淋巴结转移率明显高于成人甲状腺癌。然而，儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌的包膜外侵率相近，两组比较差异无统计学意义。分析其原因，可能与体检发现恶性结节较早、及时行手术治疗而使儿童及青少年甲状腺癌没有进展为晚期甲状腺癌有关。
综上所述，儿童及青少年甲状腺癌病人桩蛋白和踝蛋白的表达与肿瘤浸润程度和有无淋巴结转移密切相关，且儿童及青少年病人桩蛋白的表达明显高于成年病人，这可为儿童及青少年甲状腺癌的诊断、治疗以及预后管理等提供指导。
目的探讨桩蛋白和踝蛋白在儿童及青少年甲状腺癌组织表达及临床意义。方法
采用免疫组化法检测儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌中桩蛋白和踝蛋白的表达。结果桩蛋白和踝蛋白在儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌组织中均呈高表达，但儿童及青少年病人桩蛋白的表达明显高于成年病人（X2=3.894，P<0.05）。桩蛋白和踝蛋白在甲状腺癌中的表达与有无淋巴结转移和肿瘤浸润程度顯著相关（X2=4.181～7.479，P<0.05），而与病人性别和肿瘤组织类型无关（P>0.05）。儿童及青少年甲状腺癌的淋巴结转移率显著高于成人甲状腺癌（X2=16.272，P<0.05）。结论桩蛋白和踝蛋白在甲状腺癌组织中呈高表达，两种蛋白在甲状腺癌组织中的表达与有无淋巴结转移和肿瘤浸润程度密切相关，但儿童及青少年甲状腺癌更易发生淋巴结转移，这可为儿童及青少年甲状腺癌病人的诊疗和管理提供参考。
[关键词]甲状腺肿瘤；儿童；青少年；桩蛋白；踝蛋白；肿瘤转移
儿童及青少年甲状腺癌具有高淋巴结转移率、高复发率和低死亡率的特点，易发生局部侵袭和区域性淋巴结转移，与成人甲状腺癌相比表现出不同的生物学特点。行甲状腺全切或近全切除术、淋巴结清扫术以及术后进行I辅助治疗能够明显降低病人的远期病死率。儿童及青少年甲状腺癌死亡风险低，但复发和转移风险较高，有效的甲状腺癌肿瘤标志物检测可以规范儿童及青少年甲状腺癌的治疗、为其临床评估提供参考。最新研究表明，桩蛋白和踝蛋白两种细胞骨架蛋白在成人甲状腺癌癌细胞黏附和迁移中可能发挥重要作用。但国内外相关研究中未见儿童及青少年甲状腺癌病人桩蛋白和踝蛋白表达的报道。因此，本研究观察了桩蛋白和踝蛋白在儿童及青少年甲状腺癌中的表达，并分析其与儿童及青少年甲状腺癌侵袭和转移的关系，以期为儿童及青少年甲状腺癌病人的诊疗和管理提供一定参考。
1材料和方法
1.1标本来源
收集2002-2016年青岛大学附属医院病理科存档的甲状腺癌手术石蜡标本90例，其中儿童及青少年甲状腺癌30例，成人甲状腺癌60例。儿童及青少年甲状腺癌中，乳头状癌25例，滤泡状癌5例；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移7例；病人平均年龄14.31岁（6～18岁）。成人甲状腺癌60例均为乳头状癌；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移37例；病人平均年龄54.82岁（45～60岁）。石蜡标本以4 tim厚连续切片，4℃冰箱保存。研究获得医院伦理道德委员会的批准。
1.2实验方法
采用免疫组化SP法测定切片标本中桩蛋白和踝蛋白的表达水平。兔抗人桩蛋白和踝蛋白多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，通用型SP免疫组化超敏试剂盒和DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。按照试剂盒说明书进行操作，以PBS代替一抗作为阴性对照。
由两位技术人员采用双盲法在高倍显微镜下观察切片，每张切片随机选取3个视野计算阳性细胞数，根据细胞浆染色程度和染色细胞所占百分比进行评分，采用半定量积分法综合判断结果。
1.3统计学处理
采用SPSS19.0软件进行统计学分析，计数资料组间比较采用X2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1桩蛋白和踝蛋白在不同年龄病人甲状腺癌组织中的表达
桩蛋白和踝蛋白均阳性表达于甲状腺癌细胞的细胞膜和（或）细胞质，呈黄色、棕黄色或黄褐色。两种蛋白在儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌组织中均呈强阳性表达，但儿童及青少年病人甲状腺癌组织中桩蛋白表达明显高于成年病人，差异具有统计学意义（X2=3.894，P<0.05）。见表1。
2.2桩蛋白和踝蛋白表达与甲状腺癌生物学特征的关系
两种蛋白在甲状腺癌组织中的表达均与有无淋巴结转移和肿瘤的浸润程度显著相关（X2=4.181～7.479，P<0.05），而与病人性别和肿瘤组织类型无关（P>0.05）。见表1。
2.3儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌生物学特征的比较
儿童及青少年甲状腺癌病人的淋巴结转移率为83.33%，显著高于成人甲状腺癌的淋巴结转移率（38.33%），差异具有统计学意义（X2=16.272，P<0.05）。儿童及青少年甲状腺癌的包膜外浸润率为30.00%，成人甲状腺癌为40.00%，两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
3讨论
儿童及青少年甲状腺癌是临床上少见的头颈部恶性肿瘤，与成人甲状腺癌相比，具有更高的侵袭性，更易发生包膜外侵和局部组织的浸润。目前，儿童及青少年甲状腺癌的治疗多参考成人甲状腺癌，但由于其生物学特点与成人具有显著差异，故临床上会存在过度治疗或者治疗不足等问题。随着肿瘤研究在分子水平和蛋白水平的拓展，降钙素、降钙素基因相关肽、甲状腺球蛋白、促甲状腺激素受体等诸多肿瘤标志物的应用已经被证明在成人甲状腺癌的临床诊治中发挥重要作用。然而，目前国内外研究中却少见针对儿童及青少年甲状腺癌的肿瘤标志物，且所涉及肿瘤标志物的特异性、敏感性和准确性缺乏明确的实验证据支持。最近的生物医学研究表明，桩蛋白和踝蛋白两种细胞骨架蛋白在成人甲状腺癌癌细胞黏附和迁移中可能发挥重要作用，然而在儿童及青少年甲状腺癌中却未有相关的研究报道。
桩蛋白主要位于细胞骨架上的黏着斑，是一种相对分子质量为6.5万～7.0万的磷酸蛋白。由于桩蛋白可以与v-Src蛋白、v-Crk蛋白和BC/ABL癌性融合蛋白等多种致瘤性蛋白结合，扰乱甚至误导正常黏附和控制细胞增殖所需的生长因子信号级联，使得肿瘤细胞和非肿瘤细胞之间的相互黏附力增强，从而使肿瘤细胞更易发生迁徙和转移。研究表明，桩蛋白在成人甲状腺癌、乳癌、肺癌等恶性肿瘤基因转化过程中均表达异常，骨架蛋白上的黏着斑与癌蛋白发生激酶磷酸化，进而参与了肿瘤细胞活动。因此，桩蛋白的表达异常很有可能是肿瘤恶性转化的早期标志。本文研究结果显示，桩蛋白在儿童及青少年甲状腺癌和成人甲状腺癌组织中均呈强阳性表达，与有关文献的报道相一致。并且儿童及青少年病人桩蛋白的表达明显高于成年病人，提示桩蛋白参与了儿童及青少年甲状腺癌的发生发展过程。另外，伴有淋巴结转移和包膜外侵的甲状腺癌组织的桩蛋白表达阳性率显著高于未有淋巴结转移和包膜外侵组，提示桩蛋白可能促进了甲状腺癌细胞的淋巴结转移和侵袭活动。
踝蛋白是首个被发现的与整合素结合的细胞骨架蛋白，其相对分子质量为27.0万（包含2451个氨基酸）。研究表明，踝蛋白是成纤维细胞活化蛋白最主要的成分，连接整合素与肌动蛋白，同时连接多种黏附因子，在整合素介导的细胞黏附、迁移、增殖和整合素活化等过程中起着关键作用。相关研究表明，踝蛋白参与了成人甲状腺癌、原发性肝癌、结直肠癌、食管癌等恶性肿瘤的局部侵袭和淋巴结转移活动。本文研究结果显示，踝蛋白在成人甲状腺癌和儿童及青少年甲状腺癌组织中均呈高表达，这与有关文献报道的成人甲状腺癌踝蛋白的高表达较为一致，提示踝蛋白参与了甲状腺癌的发生和发展。另外，伴有淋巴结转移和包膜外侵的甲状腺癌组织的踝蛋白表达阳性率显著高于无淋巴结转移和包膜外侵组。上述结果提示，踝蛋白可能通过整合素、成纤维细胞活化蛋白以及其他骨架蛋白的信息传导，调节了甲状腺癌的发生、浸润和转移活动。
儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌相比，具有更高的侵袭性，更易发生包膜外侵和邻近组织的浸润，晚期甚至累及气管、喉返神经、上段食管及咽喉部组织。有研究结果显示，儿童及青少年甲状腺癌更容易发生颈部淋巴结的转移甚至远处肺转移。本文研究结果也表明，儿童及青少年甲状腺癌的淋巴结转移率明显高于成人甲状腺癌。然而，儿童及青少年甲状腺癌与成人甲状腺癌的包膜外侵率相近，两组比较差异无统计学意义。分析其原因，可能与体检发现恶性结节较早、及时行手术治疗而使儿童及青少年甲状腺癌没有进展为晚期甲状腺癌有关。
综上所述，儿童及青少年甲状腺癌病人桩蛋白和踝蛋白的表达与肿瘤浸润程度和有无淋巴结转移密切相关，且儿童及青少年病人桩蛋白的表达明显高于成年病人，这可为儿童及青少年甲状腺癌的诊断、治疗以及预后管理等提供指导。