鸭坦布苏病毒的研究进展

来源 :家禽科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xushaowei20092009
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  摘  要:鸭坦布苏病毒病是由坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)引起的一种以产蛋鸭产蛋量下降和雏鸭或育成鸭出现神经症状为主要特征的传染性疾病。2010年在我国江浙地区首先暴发,随后迅速波全国主要养鸭省份,给我国的养鸭业造成了极大的经济损失。本文主要从生物学特征、传播途径、流行病学、临床症状、诊断等方面阐述该病毒的最新研究进展,为其相关研究提供参考。
  关键词:鸭坦布苏病毒;暴发;研究进展
  中图分类号:S858.325.3     文献标识码:A     文章编号:1673-1085(2019)04-0055-05
  自2010年4月以来,在我国主要养鸭地区,爆发了一种新型急性传染病,该病传播迅速,可造成产蛋鸭产蛋量严重下降,肉鸭或育成鸭出现神经症状等。由于产蛋鸭感染后,其特征性病变主要表现为卵泡膜出血,该疾病最初被命名为鸭出血性卵巢炎(DHO)。进一步研究证明,该病是由一种新型黄病毒——坦布苏病毒(TMUV)引起的[1]。
  1  生物学特征
  1.1  分类学地位  2012年,国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)公布的分类结果表明,坦布苏病毒归属于黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(genus Flavivirus),是蚊媒病毒类成员。黄病毒属有病毒70余种,包含登革热病毒(Dengue virus,DENV)、日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)、西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)等多种常见病毒[2]。
  1.2  形态结构  坦布苏病毒粒子的大小直径为40~50nm[3],大小为10.9kb[4]。电镜下呈小球形,为对称的十二面体,表面有镶嵌糖蛋白的脂质包膜,病毒包膜内含有核衣壳蛋白,病毒核酸为单股正链RNA[5]。
  1.3  理化特性和培养特性  坦布苏病毒为有囊膜的单股RNA病毒,可被氯仿灭活,对去氧胆酸钠敏感。在pH为1.0~5.0时不稳定。该病毒不耐热,56℃ 15min即可灭活,37℃放置48h病毒滴度由105.75 TCID50/0.2ml下降到102.25 TCID50/0.2ml,4℃放置48h后其TCID50略有下降。1.0mol/L MgCl2不能提高病毒在50℃的稳定性[6]。此外,黄病毒大多能够凝集鹅、鸽和新生雏鸡的红细胞,但其血凝素易于破坏,而且血凝反应要求比较严格的pH域[7]。
  鸭坦布苏病毒易在9~11日龄的鸭胚、鸡胚尿囊腔或尿囊膜上生长,可以用鸭胚或SPF鸡胚来进行病毒的分离和增殖,胚的病变主要表现为:胚体出血、死亡,尿囊膜增厚,尿囊液减少[8]。鸭坦布苏病毒可以在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)上增殖,适应DEF后的病毒通常在36~48h产生CPE,随时间延长,CPE更加明显,表现为细胞折光性增强,细胞变圆以及细胞融合,最终崩解死亡[6]。
  2  流行病学
  本病最初于2010年春季在我国江苏、浙江等地流行,随后迅速扩散到我国主要的鸭养殖地区。我国华东(江苏、浙江、上海、福建、安徽、山東、江西)、华中(河南、湖南、湖北)、华北(北京、河北)、华南(广东、广西)等省区鸭群均有TMUV感染的报道[9]。
  大多数黄病毒属的病毒能引起人兽共患疾病,并呈现不同的临床症状,主要引起病毒性脑炎甚至全身性感染。节肢动物是黄病毒属病毒主要的宿主和传播媒介,在自然条件下,节肢动物的分布特点受地理环境与季节气候的影响,故该类病毒的致病性也具有明显的地域性和季节性[10]。鸭坦布苏病毒不仅能在不同品种鸭鹅中传播流行,还可感染其它动物,如猪、鸡、麻雀等[11-12]。坦布苏病毒可通过库蚊传播,鸟类特别是家禽为其贮存宿主[13]。但鸭坦布苏病毒的具体传播媒介不明。该病在秋季流行严重,推测可能与蚊虫有关,但进入蚊虫较少的冬季后,该病仍然在部分地区蔓延,因此,是否有其他的传播途径有待进一步证实[14]。
  3  临床症状及病理变化
  产蛋鸭群多以产蛋下降为主,产蛋率从产蛋高峰(80%~90%)下降至10%以下,甚至绝产,蛋壳质量变化不明显,死淘率约1%,后期有继发性细菌感染。少量鸭站立不稳,头颈抽搐、行走不稳、共济失调,病鸭双腿瘫痪,伴有呼吸系统疾病,侧卧,发病鸭多排黄绿色粪便[15]。发病鸭各脏器均有不同程度病变,可见皮下、肌肉弥散性出血;心脏肿大、出血,心肌坏死;肝脏表面有点状坏死灶,似水煮过,有块状出血片,并且呈土黄色;脾脏肿胀、出血、淤血,甚至破裂,呈斑驳样大理石纹;肺脏肿大、肾脏肿大有坏死点,偶见出血点;卵泡变性、卵泡膜出血。雏鸭脑部均出现不同程度水肿或呈树枝状充血[16]。
  鸭感染坦布苏病毒后的病理组织学变化主要表现为:肝实质严重变性、坏死;肺淤血,内有大量炎性细胞渗出;胰腺组织可见凝固性坏死灶;脾淋巴细胞局部减少;肾小管上皮细胞肿胀[17];脑部神经元细胞变性坏死,大量炎性细胞浸润并有“卫星现象”,脑部血管壁增厚,血管扩张充血,大、小脑神经胶质细胞增生,局部发生软化及坏死;肝脏有严重的脂肪变性,充满胆色素,毛细血管扩张[18]。
  4  诊断方法
  4.1  临床诊断  首先,根据鸭坦布苏病毒病的临床症状特点,产蛋鸭产蛋量骤降,死淘率大约1%;排黄绿色粪便,并且出现少量鸭站立不稳、头颈抽搐、行走不稳、共济失调症状,严重者病鸭双腿瘫痪[15]。   其次,根据其病理变化的特点,各脏器均有不同程度病变,表现为心脏肿大、出血,心肌坏死;肝脏表面有点状坏死灶,似水煮过,有块状出血片,并且呈土黄色;脾脏肿胀、出血、淤血,甚至破裂,呈斑驳样大理石纹;肺脏肿大,肾脏肿大、有坏死点,偶见出血点;卵泡变性、卵泡膜出血;脑部出现不同程度水肿或呈树枝状充血[15-16]。
  根据以上的临床症状和剖检病理变化来初步怀疑是否是鸭坦布苏病毒病,然后再进行实验室诊断方法来确诊。
  4.2  血清学诊断
  4.2.1  酶联免疫吸附试验  酶联免疫吸附试验(ELISA)方法是在实验室血清学中最常用的检测方法之一,具有特异性强、灵敏度高及检测速度快等特点,目前广泛应用于动物的疾病诊断和疫苗效果的评价。
  姬希文等[19]、张德宝[20]和陈伟国等[21]等研究利用纯化的鸭坦布苏病毒奉贤株(FX2010)作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法,并且对各种检测条件进行了优化。该方法具有较高的敏感性和特异性。施少华等研究了以纯化的鸭坦布苏病毒WR株为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体的间接ELISA方法[22]。万春和等对鸭坦布苏病毒非结构蛋白NS1基因进行原核表达,并进行生物学活性鉴定,并将表达成功具有生物学活性的重组蛋白经纯化后,作为抗原包被ELISA平板,通过条件优化,建立检测禽坦布苏病毒血清学检测方法[23]。李晨曦等利用DTMUV特异性抗原表位建立Epitopc-ELISA血清学诊断方法,并对126份鸭血清样品进行检测,以中和试验作为标准进行比较,结果显示Epitopc-ELISA检测方法的相对特异性为100%,相对敏感度为96%,并且Epitopc-ELISA与其他黄病毒血清间不出现交叉反应性[24]。
  4.2.2  乳胶凝集试验  乳胶凝集试验(LAT)具有准确灵敏、简便易行、特异性强等优点,被广泛应用于畜禽传染病的血清学检测。用于鸭坦布苏病毒抗体的临床检测,不需要特殊设备,且可在1~5min内肉眼观察判定结果,临床应用简便快速[25]。
  万春和等以经超速和密度梯度离心浓缩纯化的鸭坦布苏病毒抗原进行方阵滴定,筛选出致敏乳胶的最佳条件,并制备成鸭坦布苏病毒乳胶凝集试验(LAT)用抗原,与特异性的鸭坦布苏病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒,进而建立检测鸭坦布苏病毒抗体的乳胶凝集试验方法[25]。陈浩等用其实验室制备并纯化的抗坦布苏病毒 PrM 蛋白单克隆抗体致敏乳胶,采用方阵法,优化乳胶凝集试验的最佳条件,建立坦布苏病毒反向乳胶凝集试验并应用于临床样品的检测[26]。
  4.3  分子生物学检测技术
  4.3.1  RT-PCR检测技术  张帅等在对 DTMUV序列的比对分析的基础上,设计了1对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立了 DTMUV的一步法RT-PCR检测方法。该方法具有特异、快速、敏感、准确等特点,可以检出1.82个TCID50的病毒核酸[27]。傅光华等、祖立闯等和王永娟等根据连接酶依赖PCR工作原理设计并建立一种坦布苏病毒RT-PCR快速检测方法[28~30]。
  4.3.2  实时荧光定量RT-PCR检测技术  李庆阳等根据鸭坦布苏病毒BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测 DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法[31]。万春和等根据鸭坦布苏病毒NS5基因序列设计引物,建立基于SYBGreenⅠ检测模式的实时荧光定量 RT-PCR,该方法在2.74×103~2.74×107拷贝/μl反应范围内有很好的线性关系[32]。刘青涛等根据鸭坦布苏病毒NS2A基因的保守序列,设计并合成了1对特异性引物,建立了一步法实时定量RT-PCR检测方法[33]。
  张艳芳等针对GenBank中DTMUV基因和鸭瘟病毒(DPV)UL6基因的保守序列,设计合成了2对引物和2条TaqMan探针。通过优化反应体系和条件,建立了鉴别DTMUV和DPV的二重荧光定量RT-PCR方法[34]。孙敏华等参考GenBank上已发表的产蛋下降综合征病毒(EDSV)五邻体基因序列、H9亚型禽流感病毒的HA基因和鸭坦布苏病毒E基因序列,分别设计了检测EDSV、H9 AIV和DTMUV的特异性引物,扩增目的片段大小分别为110bp、281bp和266bp,通过PCR验证及引物浓度的优化,建立了针对这3种病毒的三重荧光 PCR检测方法。该方法可以同时检测EDSV、H9AIV和DTMUV,且不能检出1型鸭甲肝病毒、3型鸭甲肝病毒、番鸭呼肠孤病毒、鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒、新城疫病毒和大肠杆菌基因组 DNA,敏感性试验表明,该方法对EDSV、H9 AIV和DTMUV核酸的检测下限分别为8.0、4.8和1.3个拷贝,比常规PCR方法敏感10倍[35]。
  4.3.3  反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测技术  LAMP技术通过两对引物,利用Bst DNA聚合酶的链置换活性提供反应的动力,在恒温条件下完成对核酸的扩增反应[36]。该技术于恒温条件下几十分钟内即可完成,无需昂贵的仪器设备,结果可肉眼直接观察,具有简便、快速、灵敏度高、特异性好等特点[37]。韩凯凯、董嘉文和吴植等根据GenBank中登录的鸭坦布苏病毒基因序列,分别建立了基于LAMP技术的鸭坦布苏病毒检测方法[38~40]。
  5  结语
  鸭坦布苏病毒病在我国流行以來,对我国养殖业带来了严重的危害,对养殖户造成了极大的经济损失。目前市场上已有商品化的弱毒疫苗,并对该病起到了很好的防控作用。当前对鸭坦布苏病毒的研究已经很多,但是在传播途径、致病机制和公共卫生等方面还需要更深一步的研究。   参考文献:
  [1]  曹贞贞,张存,黄瑜,等.鸭出血性卵巢炎的初步研究[J].中国兽医杂志,2010,(12):3-6.
  [2]  Calisher. C.H., N. Karabatsos, J. M. Dalrymple, et al.Antigenic relationships between flaviviruses as determined by cross-neutralization tests with polyclonal antisera [J].J Gen Virol,1989,70(Pt 1):37-43.
  [3]  Tang. Y., Diao Y., Yu C., et al. Rapid detection of Tembusu virus by reverse-transcription, loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP)[J]. Transbound Emerg Dis,2012,59(3):208-213.
  [4]  胡旭东,路浩,刘培培,等.我国发现的一种引起鸭产蛋下降综合征的新型黄病毒[J].中国兽医杂志,2011,47(7):43-47.
  [5]  Hase. T., P.L.Summer, K. H. Eckels, et al. An electron and immunoelectronmicroscopic study of dengue-2 virus infection of cultured mosquito cells:maturation events [J].Arch Virol,1987,92(3-4):273-291.
  [6]  马秀丽,于可响,高凤,等.鸭黄病毒BZ株的生物学特性研究[J].中国家禽,2011,33(21):12-14.
  [7]  殷震,刘景华.动物病毒学第2版[M].北京:科学出版社,1997.
  [8]  赖芳芳,陈孝明,张健騑,等.肉鸭中黄病毒的分离与鉴定[J].中国畜牧兽医,2013,40(02):179-182.
  [9]  梁特.坦布苏病毒毒株间毒力差异的分子基础[D].北京:中国农业大学,2017.
  [10]  Gould. E., T. Solomon. Pathogenic flaviviruses [J]. The Lancet, 2008, 371(9611): 500-509.
  [11]  Liu Z, Ji Y, Huang X, et al. An adapted duck Tembusu virus induces systemic infection and mediates antibody-dependent disease severity in mice. Virus Res., 2013, 176 (1-2): 216-222.
  [12]  Tang Y, Diao Y; Chen H, et al. Isolation and genetic characterization of a tembusu virus isolated from mosquitoesin Shandong,China. Transbound: Emerg. Dis.,2015,62(2):209-216.
  [13]  Platt G S, Way H J, Bowen E T, et al. Arbovivirus infections in Sarawak,October 1968-February 1970 Tembusu and Sindbis virus isolations from mosquitoes [J].Ann Trop Med Parasitol, 1975, 69(1): 65-71.
  [14]  朱丽萍,颜世敢.鸭坦布苏病毒研究进展[J].中国预防兽医学报,2012,34(01):79-82.
  [15]  李玉峰,马秀丽,于可响,等.一种从鸭新分离的黄病毒研究初报[J].畜牧兽医学报,2011,42(06):885-891.
  [16]  秦绪伟,王蕾.疑似鸭黄病毒病的诊断与初步鉴定[J].今日畜牧兽医,2017(10):63-64.
  [17]  王友令,袁小远,杨金兴,等.1株鸭坦布苏病毒人工感染雏鸭的病理学研究[J].畜牧兽医学报,2013,44(01):66-70.
  [18]  王贝贝,邓守全,马德慧,等.禽坦布苏病毒的研究进展[J].中国生物制品学杂志,2018(01):87-92.
  [19]  姬希文,闫丽萍,颜丕熙,等.鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立[J].中国预防兽医学报,2011,33(08):630-634.
  [20]  张德宝,李雪松,郁宏伟,等.鸭坦布苏病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的初步应用[J].中国家禽,2017,39(19):22-26.
  [21]  陈伟国,申翰钦,王占新,等.鸭坦布苏病毒病EDⅢ-ELISA方法的建立[J].養禽与禽病防治,2016(08):4-9.
  [22]  施少华,傅光华,万春和,等.检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体间接ELISA方法的建立[J].养禽与禽病防治,2012(02):2-4.   [23]  万春和,潘异哲,傅秋玲,等.禽坦布苏病毒NS1-ELISA的初步建立[J].福建农业学报,2015,30(11):1027-1031.
  [24]  李晨曦,白小飞,邵周,等.鸭坦布苏病毒E蛋白特异性抗原表位鉴定及Epitope-ELISA血清学诊断方法建立[J].畜牧兽医学报,2017,48(10):1958-1968.
  [25]  万春和,傅秋玲,陈珍,等.乳胶凝集试验方法在检测鸭坦布苏病毒抗体中的应用[J].福建农业学报,2013,28(12):1200-1203.
  [26]  陈浩.坦布苏病毒乳胶凝集试验检测方法的建立与应用[A].中国畜牧兽医学会(Chinese Association of Animal Science and Veterinary Medicine).中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C].中国畜牧兽医学会(Chinese Association of Animal Science and Veterinary Medicine),2014:1.
  [27]  张帅,云涛,叶伟成,等.鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR检测方法的建立和应用[J].浙江农业学报,2012,24(01):37-40.
  [28]  傅光华,黄瑜,程龙飞,等.禽坦布苏病毒连接酶依赖RT-PCR检测方法的建立及应用[J].福建农业学报,2013,28(07):639-643.
  [29]  祖立闯,李嬌,高鹏,等.鸭坦布苏病毒一步RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J].广东畜牧兽医科技,2015,40(05):37-40.
  [30]  王永娟,董亚青,郭方超,等.鸭坦布苏病毒RT-PCR检测方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医,2017(10):105-107.
  [31]  李庆阳,陈芳艳,刘平,等.鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J].动物医学进展,2012,33(07):18-22.
  [32]  万春和,朱海侠,施少华,等.鸭坦布苏病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法的建立[J].中国兽医学报,2013,33(07):973-978.
  [33]  刘青涛,李银,赵冬敏,等.一步法SYBR Green实时定量RT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立[J].江苏农业学报,2015,31(04):829-833.
  [34]  张艳芳,谢芝勋,谢丽基,等.鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立[J].中国畜牧兽医,2014,41(03):77-82.
  [35]  孙敏华,李林林,董嘉文,等.鸭坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒和H9亚型禽流感病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立[J].广东畜牧兽医科技,2017,42(04):37-42.
  [36]  PARIDA M, SANNARANGAIAH S, DASH PK, et al.Loop mediated isothermal amplification (LAMP): a new generation of innovative gene mplification technique; perspectives in clinical diagnosis of infectious diseases[J].Rev Med Virol,2008,18(6): 407-21.
  [37]  石霖.北方某省主要亚型禽流感现地调查分析及RT-LAMP检测方法研究[D].哈尔滨:东北农业大学,2015.
  [38]  韩凯凯,李银,黄欣梅,等.鹅源坦布苏病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J].浙江农业学报,2014, 26(01):29-33.
  [39]  董嘉文,孙敏华,李林林,等.实时荧光技术在鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测方法中的应用[J].广东农业科学,2015,42(01):109-112.
  [40]  吴植,夏文龙,蔡树东,等.鸭坦布苏病毒可视化RT-LAMP快速检测方法的建立与初步应用[J].中国畜牧兽医,2017,44(11):3334-3339.□
  收稿日期:2019-03-22
  *基金项目:国家重点研发计划(2016YFD0500800);山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队计划(SDAIT-11-01)。
  作者简介:任斌斌,男,山东人,硕士研究生,E-mail:renbinbinhappy@163.com。
  **通讯作者:黄兵(1973.12-),男,贵州余庆人,研究员,研究方向为动物分子病毒学与免疫学,一直从事新城疫、禽流感、传染性支气管炎等禽重要传染性疾病快速检测技术、无特定病原鸡微生物监测技术及基因工程药物的研究,E-mail:hbind@163.com。
其他文献
食管癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一,放疗作为食管癌治疗的重要手段,不仅能使食管癌患者症状缓解,延长生存期达到姑息性效果,而且还能使相当部分病人获得根治。我院自1994年
近年来,随着养殖规模的不断扩大,加上种鸡和种蛋的交易日益频繁,疫病不断复杂化和常见化,鸡败血支原体病在我市呈地方性流行和散发流行,该病呈上升趋势。感染该病后可引起家鸡饲料
脊髓灰质炎后遗症患者中臀肌瘫痪较常见。其发生率仅次于膝屈畸形和短缩畸形,臀肌瘫痪后常致髋关节后伸外展外旋无力,关节不稳,功能障碍,步态不良,严重者髋关节半脱位或脱位
近年来。由于基层医院胆囊手术的普遍开展,胆囊切除术后的并发症较多,如何作好胆囊切除术,防止其并发症的发生,是每一位普外科医生必须重视的问题。根据近3年来我科收治的医
阑尾炎在外科临床中系常见病、多发病。其典型病例很易作出诊断,但对少数病例可因阑尾异位等原因不易得出准确诊断。1990年1月~1997年12月,我们曾收治腹膜外阑尾炎10例,由于未
住院外伤患者致伤原因分析,可进一步探索和掌握外伤发生的规律,为采取有效预防措施提供科学依据。本文对我院1991-1996年期间收治的4408例住院外伤患者的致伤原因按ICD-9国际
湖南年出笼家禽约4亿羽,在养殖业中位居第二.如采用自然交配,则公鸡母鸡比例为1:10.如果采用人工输精,则为1:30左右.若将原精稀释2!3倍,则可将公母比例扩大到1:60-90,能充分提高
目的:探讨及评价CT对卵巢肿瘤的诊断价值及限度。方法:回顾性分析25例经手术病理证实的卵巢肿瘤的CT表现。结果:CT对卵巢肿瘤的发现率为98%,对良性肿瘤诊断正确率为98%,恶性肿
基层医院抢救重度脑挫裂伤由于受条件和设备的限制,成功率较低,现将我院抢救成功1例报道如下。 1 病历摘要 患者,男,32岁,因车祸致开放性颅脑损伤并出血30min,于1998年7月23