【摘 要】
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目的 研究一种质粒DNA荧光标记的简便方法,以便进行DNA递送的示踪.方法 质粒经 溴激活后,于不同温度下存放不同时间,再与1,10-二氨基葵烷形成氨基衍生物.氨基修饰质粒与荧
【机 构】
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中国医学科学院 北京协和医学院生物医学工程研究所
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目的 研究一种质粒DNA荧光标记的简便方法,以便进行DNA递送的示踪.方法 质粒经 溴激活后,于不同温度下存放不同时间,再与1,10-二氨基葵烷形成氨基衍生物.氨基修饰质粒与荧光素异硫氰酸酯( FITC)反应,制备出荧光标记的质粒,纯化并收集产物,计算其标记效率,评估溴激活质粒在不同温度下存放不同时长对标记反应的影响；观察荧光标记对质粒转染效率的影响,并用激光共聚焦显微镜观察和流式细胞仪检测示踪效果.结果 实验数据显示溴活化的质粒随存放时间的延长标记效率反而下降,存放4℃较室温(25℃)的标记效率更高,提示溴活化质粒不适宜存放；而与没有标记的质粒相比,荧光标记的质粒对转染效率几乎没有影响.荧光标记的质粒应用于流式细胞仪检测和激光共聚焦显微观察都取得了较好的示踪效果.结论 本研究建立了一种荧光标记质粒DNA的简便方法,并且在基因递送的示踪实验中获得了较好的效果.
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