【摘 要】
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目的研究人骨关节炎关节软骨细胞的体外分离及培养方法,观察各代人关节软骨细胞的形态学特性,为临床基础研究提供参考依据。方法取全膝置换术患者残存的无菌膝关节软骨,采用
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目的研究人骨关节炎关节软骨细胞的体外分离及培养方法,观察各代人关节软骨细胞的形态学特性,为临床基础研究提供参考依据。方法取全膝置换术患者残存的无菌膝关节软骨,采用两步酶消化法(胰蛋白酶+Ⅱ型胶原酶)分离培养人关节软骨细胞,并进行传代培养。通过倒置相差显微镜下观察每代的细胞形态,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色对细胞进行进一步鉴定后绘制生长曲线。结果两步酶消化法消化出的软骨细胞呈接近圆形,培养2~3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形或条状,2周左右细胞融合成层,4代后出现明显分化,软骨细胞增殖和生长缓慢。形态学、免疫组织化学染色显示细胞培养4代以内可以保持表型的稳定。结论体外培养骨关节炎软骨细胞4代以内生长良好,生物学特性明显,4代以后出现去分化现象,提示我们2或3代骨关节炎软骨细胞是用于实验研究的最佳选择。
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