【摘 要】
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目的通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(mPPARγ2)基因整合入MH3T3细胞基因组中并进行表达.方法从经测序证实含正确序列mPPARγ2的重组质粒pcDNA
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目的通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(mPPARγ2)基因整合入MH3T3细胞基因组中并进行表达.方法从经测序证实含正确序列mPPARγ2的重组质粒pcDNA3/mPPARγ2中,双酶切下约1.5 Kb的mPPARγ2全长cDNA编码序列,亚克隆入逆转录病毒载体pGCEN中构建重组逆转录病毒载体pGCEN/mPPARγ2.pGCEN/mPPARγ2及pGCEN经LipofectAMINE感染病毒包装细胞系PA317细胞,通过筛选PA317细胞G418抗性克隆,收集病毒上清,然后用其感染靶细胞NIH3T3细胞,用免疫荧光染色及Westem印迹方法鉴定mPPARγ2在NIH3T3细胞中的表达情况.结果构建了含mPPARγ2全长cDNA重组逆转录病毒载体,获得了滴度分别为5×104CFU/ml和6×105 CFU/ml的pGCEN/mPPARγ2及pGCEN的病毒上清.经鉴定pGCEN/mPPARγ2能有效地感染靶细胞NIH3T3细胞并表达mPPARγ2.结论本研究结果为在体外建立脂肪细胞分化模型及为进一步研究PPARγ2在诱导脂肪细胞分化中的分子机制奠定了基础.
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