【摘 要】
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目的建立适用于检测人胱抑素C(Cystatin C)的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗
【基金项目】
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国家自然科学基金(NO:81273530);四川省教育厅青年基金(NO:10ZB095);成都医学院综合性、设计性实验项目(NO:ZH201114);成都医学院横向课题(NO:10H018);成都医学院科研基金(NO:CYZ11-005)
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目的建立适用于检测人胱抑素C(Cystatin C)的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I:捕捉抗体IgG+检测抗体IgY+抗鸡IgY酶标抗体;Ⅱ:捕捉抗体IgG+检测抗体IgY+兔F(ab’)2抗鸡酶标抗体;Ⅲ:捕捉抗体IgY+检测抗体IgG+抗兔IgG酶标抗体。通过比较Cystatin C的最低检测浓度和阴性对照的OD值评价三种夹心法的灵敏度和特异性。结果体系I的Cystatin C最低检测浓度为7.5ng/mL(阴性对照OD值为0.737),体系Ⅱ的Cystatin C最低检测浓度为13ng/mL(阴性对照OD值为0.313),体系Ⅲ的Cystatin C最低检测浓度为10ng/mL(阴性对照OD值为0.31)。结论成功建立了Cystatin C的双抗体夹心ELISA检测体系,体系I的灵敏度最高但其特异性差,体系Ⅱ和Ⅲ的检测灵敏度和特异性均较好,可以用于Cystatin C的检测。
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