过表达膜联蛋白A1的人脂肪间充质干细胞治疗急性呼吸窘迫综合征小鼠的效果及其机制

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目的

探索过表达膜联蛋白A1(ANXA1)的人脂肪间充质干细胞(AMSC)治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠的效果及其机制。

方法

采用实验研究方法。采用流式细胞术鉴定成人AMSC后,取第3代细胞进行后续实验。采用随机数字表法(分组方法下同),将细胞分为转染含ANXA1基因RNA序列的质粒的过表达ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组,另取细胞分为转染含ANXA1基因小干扰RNA序列的质粒的敲减ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组,转染后72 h,于荧光显微镜成像系统下观察荧光表达情况,分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测ANXA1的蛋白和mRNA表达(样本数均为3)。取50只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为假伤组、单纯ARDS组、正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组,每组10只。将后4组小鼠均用内毒素/脂多糖制成ARDS肺损伤模型,假伤组小鼠模拟致假伤。伤后即刻,假伤组、单纯ARDS组小鼠均经尾静脉注射生理盐水,正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组小鼠对应注射正常AMSC、过表达ANXA1的AMSC、敲减ANXA1的AMSC。注射后24 h,取每组5只小鼠,行伊文思蓝染色观察右肺组织大体染色情况,采用酶标仪检测左肺支气管肺泡灌洗液(BALF)上清液的吸光度值,了解肺血管通透性。注射后3 d,取各组剩余5只小鼠,取右肺组织,行苏木精-伊红染色观察病理学变化,行免疫组织化学染色观察CD11b和F4/80阳性巨噬细胞情况;采用酶联免疫吸附测定法检测左肺BALF上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β水平。对数据行配对样本t检验、单因素方差分析与LSD检验。

结果

转染后72 h,过表达ANXA1组与敲减ANXA1组AMSC均分别较对应空载对照组AMSC表达更高强度的荧光。转染后72 h,与对应空载对照组比较,过表达ANXA1组AMSC中ANXA1蛋白与mRNA表达均明显增多(t值分别为249.80、6.56,P

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