探索过表达膜联蛋白A1(ANXA1)的人脂肪间充质干细胞(AMSC)治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠的效果及其机制。
方法采用实验研究方法。采用流式细胞术鉴定成人AMSC后,取第3代细胞进行后续实验。采用随机数字表法(分组方法下同),将细胞分为转染含ANXA1基因RNA序列的质粒的过表达ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组,另取细胞分为转染含ANXA1基因小干扰RNA序列的质粒的敲减ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组,转染后72 h,于荧光显微镜成像系统下观察荧光表达情况,分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测ANXA1的蛋白和mRNA表达(样本数均为3)。取50只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为假伤组、单纯ARDS组、正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组,每组10只。将后4组小鼠均用内毒素/脂多糖制成ARDS肺损伤模型,假伤组小鼠模拟致假伤。伤后即刻,假伤组、单纯ARDS组小鼠均经尾静脉注射生理盐水,正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组小鼠对应注射正常AMSC、过表达ANXA1的AMSC、敲减ANXA1的AMSC。注射后24 h,取每组5只小鼠,行伊文思蓝染色观察右肺组织大体染色情况,采用酶标仪检测左肺支气管肺泡灌洗液(BALF)上清液的吸光度值,了解肺血管通透性。注射后3 d,取各组剩余5只小鼠,取右肺组织,行苏木精-伊红染色观察病理学变化,行免疫组织化学染色观察CD11b和F4/80阳性巨噬细胞情况;采用酶联免疫吸附测定法检测左肺BALF上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β水平。对数据行配对样本t检验、单因素方差分析与LSD检验。
结果转染后72 h,过表达ANXA1组与敲减ANXA1组AMSC均分别较对应空载对照组AMSC表达更高强度的荧光。转染后72 h,与对应空载对照组比较,过表达ANXA1组AMSC中ANXA1蛋白与mRNA表达均明显增多(t值分别为249.80、6.56,P