【摘 要】
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目的 观察多效蛋白(PTN)基因沉默后,人小细胞肺癌H446细胞中与血管新生、肿瘤生长、侵袭过程相关的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、angiomotin(Amot)、schlafen5(Slfn5)和金属
【基金项目】
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苏州市科教兴卫青年科技项目资助项目;
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目的 观察多效蛋白(PTN)基因沉默后,人小细胞肺癌H446细胞中与血管新生、肿瘤生长、侵袭过程相关的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、angiomotin(Amot)、schlafen5(Slfn5)和金属蛋白酶9(MMP-9)4种基因的表达变化.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法 检测PTN在H446细胞中的表达.构建干扰PTN表达的慢病毒载体,在293T细胞中包装成病毒后感染H446细胞.RT-PCR检测未干扰细胞组、阴性对照组、PTN抑制组和PTN抑制加化疗组细胞中Amot、Slfn5、MMP-9和VEGF的表达.结果 RT-PCR和Western blot检测结果 均表明,PTN基因在H446细胞中高表达.所构建的shRNA序列(GCAGCTGTGGATACTGCTGAA)对H446细胞PTN mRNA表达的抑制效率达72.1%,对PTN蛋白表达的抑制效率为59.2%.FIN基因沉默后,H446细胞中Slfn5和MMP-9的表达分别较阴性对照组上调了165.1%和47.3%,而Amot和VEGF的表达分别较阴性对照组下调了33.1%和26.6%.协同化疗后,上述趋势更为明显.结论 通过构建PTN小干扰RNA(siRNA)慢病毒表达载体沉默PTN基因,可以影响H446细胞增殖和转移相关基因的表达变化.
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