目的　探讨 １６ＳｒＤＮＡ基因序列分析在非哺乳期乳腺炎患者病原菌检测中的应用价值。方法　采集 ３３份非哺乳期乳腺炎标本，分别进行传统的细菌镜检、微生物培养与鉴定，并提取其 ＤＮＡ进行 ＰＣＲ扩增及 １６ＳｒＤＮＡ测序分析。结果　革兰染色法 ４１．１８％（７／１７）查见 Ｇ＋细菌，３５．２９％（６／１７）查见 Ｇ-细菌。微生物培养仅 １例阳性（１／５）且呈现两种细菌生长。１６ＳｒＤＮＡ测序阳性率为 １００％，其中 ３９．３９％（１３／３３）为混合细菌感染，２７．２７％（９／３３）为假单胞菌属，６．０６％（２／３３）为 ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔｉｉ．棒状杆菌，６．０６％（２／３３）为屎肠球菌，３．０３％（１／３３）为坚硬芽孢杆菌，３．０３％（１／３３）为芽孢八叠球菌，３．０３％（１／３３）为金黄色葡萄球菌，１２．１２％（４／３３）为宏基因组文库细菌。结论　应用 １６ＳｒＤＮＡ测序技术检测非哺乳期乳腺炎病原菌具有简便快速、灵敏度高、特异性强等优点，且可为临床合理选择抗生素提供线索。