目的建立基于人工多表位抗原的恶性疟疾抗血清筛查方法。方法以人工多表位抗原M.RCAg-1(malaria random constructed antigen-1)和M.RCAg-3(malaria random constructed antigen-3)作为检测蛋白,建立间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法,并对两种方法的抗原包被量、一抗稀释度、封闭液、孵育时间及显色时间进行优化。用两种方法检测恶性疟疾病人和正常人血清抗体水平,比较其敏感度,选出最佳检测方法,并检验其特异性和精密性。结果间接ELISA法最佳检测条件:以0.1μg/孔浓度的抗原包被酶标板120 min,用3%羊血清封闭120 min,加入一抗(1∶200稀释)孵育120 min,加入二抗(1∶20 000稀释)孵育60 min,TMB显色10 min;双抗原夹心ELISA法最佳检测条件:一抗稀释度为1∶20,二抗稀释度为1∶100,其他同间接ELISA法。经敏感性比较,确定以M.RCAg-1为抗原的间接ELISA法为最佳检测方法,且该抗原对间日疟血清抗体无明显交叉反应,该方法的批内和批间精密性试验变异系数(CV)为3.05%~5.82%和4.75%~8.54%,均<10%。结论单独包被M.RCAg-1的间接ELISA法的检出率高,特异性和精密性良好,操作简便,可用于疫区恶性疟疾的血清流行病学筛查。