【摘 要】
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目的 构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株.方法 采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T栽体连接.
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的 构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株.方法 采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T栽体连接.双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-).构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平.结果 pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的 基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建.Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,差异有统计学意义(P
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