【摘 要】
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目的:构建人LY6D真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达和定位。方法:提取HEK293T细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增LY6D基因的CDS序列,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体
【机 构】
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中国医科大学生命科学学院细胞生物学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(编号:81372337)
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目的:构建人LY6D真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达和定位。方法:提取HEK293T细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增LY6D基因的CDS序列,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞HEK293T中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。然后利用激光扫描共聚焦显微镜观察LY6D在HEK293T细胞内的定位,最后Q-PCR检测过表达LY6D真核表达载体影响EMT关键基因的表达。结果:LY6D基因cDNA的编码区序列克隆
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