植物毒素茄格孢吡喃酮A的研究

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致病真菌Ascochyta rabiei感染鹰嘴豆植物体产生三种植物毒素,茄格孢吡喃酮A,茄格孢吡喃酮B和茄格孢吡喃酮C,其中茄格孢吡喃酮A的毒性最大,往往在感染的植物体中表现出植物体变黄,植物茎部变脆,易折断等病理现象,严重时导致整个植物体因枯萎病而死亡.体外培养Ascochyta rabiei研究已知,该致病菌产生一些叫做茄格孢吡喃酮的植物毒素.当用分离提纯的茄格孢吡喃酮A毒素喂养植物体时虽然出现了与病菌感染植物体完全一样的病理现象,但研究者均不能从感染植物体或者体外喂养毒素的植物体中重新分离到该毒素,很可能这种毒素通过某种机制被鹰嘴豆植物细胞代谢转换成另外一种物质.为了研究这一过程,我们提取鹰嘴豆植物的蛋白质提取物(30%-70%硫氨饱和沉淀法)于实验室条件下分离提取并用HPLC方法鉴定植物毒素茄格孢吡喃酮A反应.不管还原物质NADPH存在或者不存在,发现植物毒素茄格孢吡喃酮A消失,即使在鹰嘴豆蛋白制备物加热沸腾处理后与毒素的反应中也出现植物毒素茄格孢吡喃酮A的大量丢失,说明蛋白质制备物很可能不是酶.HPLC(高压液相色谱)检测反应产物时出现了一个新物质.NMR(核磁共振)确定该物质为脱甲基的茄格孢吡喃酮A.进一步的研究得知,该脱甲基的茄格孢吡喃酮A不是鹰嘴豆植物蛋白质提取物的作用下产生的,而是分离蛋白质用的硫氨作用于该植物毒素产生的.用透析方法除掉硫氨后的鹰嘴豆植物蛋白质制备物与该毒素反应时,脱甲基茄格孢吡喃酮A不再出现.但仍有茄格孢吡喃酮A植物毒素的丢失.最后发现,分离提纯蛋白质制备物所用的离子交换柱(FPLC)试剂Tris-HCl和NaCl也会导致茄格孢吡喃酮A植物毒素的丢失.与一些非特异性蛋白质化学物反应时,茄格孢吡喃酮A植物毒紊还是存在大量的丢失.所有这些研究结果显示,这一种植物毒素茄格孢吡喃酮A似乎具有较高的反应活性,很可能与植物体中的一些物质结合或者局部反应.正因为是这一原因不能从感染植物体或者体外喂养毒素的植物体中重新分离到该毒素,而感染植物或体外喂养毒素的植物仍然表现出明显的病理现象.植物毒素茄格孢吡喃酮A的这种易反应特性,可能就是它对植物体具有较强毒性的原因之一.
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