柴胡ISSR—PCR反应体系的建立与优化

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目的建立适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系;筛选适宜引物,并确定最佳退火温度。方法CTAB法提取叶片DNA,通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系为25μl总体积中含有1×Taq酶缓冲液,2.0mmol/L MgCl2,各0.15mmol/L的dNTPs,0.3μmol/L引物,1.5U Taq酶(上海生工),20ng模板DNA,2%去离子甲酰胺。在100条引物中筛选出30条扩增条带清晰且条带数目较多的
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