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[摘要] 目的 检测外周静脉血以及精浆中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的水平，探讨不同术式输精管结扎术术后对象体内氧化损伤情况。方法 用8-OHdG酶联免疫试剂盒两组不同术式输精管结扎术术后对象外周静脉血以及精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平，然后进行统计学分析。 结果 经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象外周静脉血以及精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平均低于经阴囊的传统输精管低位结扎术术后对象（P<0.05），两组不同术式术后对象精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平低于外周静脉血中的水平（P<0.05）。 结论 从降低输精管结扎术术后对象可能存在的DNA氧化损伤，建议手术入路宜选择在较高位置。
[关键词] 计划生育；手术；8-羟基脱氧鸟苷
[中图分类号] R699.8 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）15-205-04
[Abstract] Objective To detect the level of 8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine（8-OHdG） in peripheral venous blood and seminal plasma，to study the situation of intracorporal oxidative damage in patients after different surgical methods of vasectomy. Methods To statistical analyze the level of 8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine in peripheral venous blood and seminal plasma of patients after different surgical methods of vasectomy by 8-OHdG enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） in the two groups. Results The level of 8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine in peripheral venous blood and seminal plasma of patients with high vasectomy through the inguinal was lower than which with traditional low vasectomy through the scrotum（P<0.05），while which of different surgical methods of vasectomy in plasma was lower than which in peripheral venous blood（P<0.05）. Conclusion The surgical approach of vasectomy should be selected on higher position as which could decrease the possible DNA oxidative damage.
[Key words] Family planning；Operation；8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine
输精管结扎术（简称男扎术）具有安全、有效、简单、经济等优点[1]，目前常用手术方式主要有两种：经阴囊的传统输精管低位结扎术（本文简称为低位结扎）和经腹股沟的输精管高位结扎术（本文简称为高位结扎）。男性参与计划生育不仅有利于控制家庭规模和降低生育率水平，而且有利于保障育龄妇女生殖健康，进一步改善和提高妇女的社会地位，对家庭和谐、社会稳定及发展有重要作用[2]。本课题通过研究不同术式输精管结扎术术后对象外周静脉血以及精浆中的8-OhdG水平，试图探讨其与并发症发生之间的相互关系，从DNA氧化损伤水平进行研究，期望完善对不同术式输精管结扎术的临床应用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机收集2007年3月～2015年3在揭东县计划生育服务站和广东省计划生育科学技术研究所经阴囊的传统输精管低位结扎术和经腹股沟的输精管高位结扎术术后各60例，年龄25～41岁，平均29岁，手术至今最长时间8年，最短时间2年，根据相关的标准和暴露因素在课题组成员单位中随机收集入组对象，分为经阴囊的传统输精管结扎术和经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象。将经阴囊的传统输精管低位结扎术术后对象定为低位结扎组，经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象定为高位结扎组。
1.2 纳入条件
输精管结扎术术后患者：（1）施行手术二年（含二年）以上；（2）排除性传播性疾病；（3）排除性功能、射精功能障碍。
1.3 设备
ELX-800酶标仪、8-羟基脱氧鸟苷（8-OhdG）特异性单克隆抗体试剂盒。
1.4 方法
用ELX-800酶标仪通过标准曲线计算样品中8-OhdG浓度。本课题通过临床实验研究对经阴囊的传统输精管结扎术和经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象，随机收集各60例，空腹抽取外周静脉血及手淫取精，2000r/min离心10min，留取血清及精浆，-80℃冰箱保存，进行临床试验研究，获得各组人群中的外周静脉血以及精浆中8-OHdG相关水平的参数，了解不同术式输精管结扎术术后对象8-OHdG与并发症的相互关系，从而探索导致男性不育的可能机理。试图探讨其与并发症发生之间的相互关系，从DNA氧化损伤水平进行研究，期望完善对不同术式输精管结扎术的临床应用。
对不同术式输精管结扎术术后对象进行外周静脉血以及精浆中的8-OHdG检测的研究，期望获得相关人群的外周静脉血以及精浆中8-OHdG的相关水平。从分子生物学水平探讨不同术式减少输精管结扎术术后并发症的相关机制。 1.5 统计学处理
数据整理后采用双人双机录入，所有数据采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，计数资料进行x2检验，计量资料采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 精液常规
所有对象精液常规均显示无精子存在，证明输精管结扎手术成功。
2.2 外周静脉血以及精浆中的8-OhdG水平比较
高位结扎术术后对象外周静脉血中8-羟基脱氧鸟苷的水平低于低位结扎术术后对象，差异比较具有统计学意义（P<0.05）；高位结扎术术后对象精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平低于低位结扎术术后对象，比较差异具有统计学意义；外周静脉血以及精浆中的8-OHdG水平比较，见表1。
2.3 两组术后并发症比较
高位结扎术术后对象术后并发症的发生低于低位结扎术术后对象，差异具有统计学意义（P<0.05），两见表2。
3 讨论
分子生物学的研究发现，人类DNA分子中的鸟嘌呤碱基受到活性氧自由基如羟自由基、单线态氧等攻击后，其第8位C原子容易结合-OH而产生一种氧化性加合物8_羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2'-deoxyguanine，8-OHdG），这种DNA氧化损伤产物能够被DNA修复酶剪切清除而经肾脏随尿排泄。在已知的大约20种DNA氧化产物中，8-OHdG生成量相对较高，且不受饮食影响，能用灵敏度较高的分析方法检测，易于检出。由于其与突变明显相关，其含量可以反映机体的DNA氧化损伤程度，已成为目前国际上公认的一种新型的评价机体的DNA氧化损伤和机体氧化应激状态的敏感指标和生物标志物[3]。另外，8-OHdG如果不被机体有效清除，会进而引起DNA复制过程的G-C/A-T型碱基对配对错误而引起基因的点突变以至癌变。
本研究同时使用外周静脉血以及精浆检测8-OHdG水平，结果显示：经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象外周静脉血以及精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平均低于经阴囊的传统输精管低位结扎术术后对象，同时输精管结扎高位术后并发症也低于经阴囊的传统输精管低位结扎术术后对象，表明8-OHdG水平升高确实影响术后并发症的发生；两组不同术式术后对象精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平低于外周静脉血中的水平，显示外周静脉血中8-OHdG水平敏感于精浆。
国内外许多资料表明[4-14]，机体8-OHdG含量与癌症、衰老的发生、发展具有一定相关关系。因此，从降低8-OHdG水平出发，建议采用经腹股沟的输精管高位结扎术的手术方法落实男性采取避孕机制，这与本课题组成员之前完成的输精管高位结扎术可以减少输精管结扎术后并发症相一致[15]。但是，近年来国内外有关专家学者研究认为8-OHdG水平亦与年龄、性别以及日照、剧烈运动、吸烟、饮酒、辐射等生活方式有关，而且与年龄、紫外线照射时间、吸烟、饮酒、辐射呈现正相关性关系[16-25]。加之，采用经腹股沟的输精管高位结扎术需要在腹部两侧腹股沟处出现两个切口，日后万一需要行输精管吻合术难度大、成功率低。此外日本Seino T[26]、Tamura H[27]等还发现在体外受精-胚胎移植辅助生殖技术中精液中的8-OHdG水平与卵母细胞受孕率成反比。因此研究外周静脉血以及精浆中的8-OHdG水平在对输精管结扎术术后对象的评估和临床治疗中有着重要意义。因此，建议输精管结扎术采用距离睾丸、附睾较高的位置，不必要一味采用经腹股沟的，完全可以选择经阴囊的距离睾丸、附睾有足够高的位置作为手术入口，这样子可以减少机体8-OHdG含量，同时降低输精管结扎术术后并发症的发生。
[参考文献]
[1] 黄孔明.输精管结扎术并发症流行病学调查[J].生殖与避孕，1986，6（6）：36.
[2] 国家人口和计划生育委员会人事司编.全国计划生育中级专业技术资格考试指导与题集[M].中国人口出版社，2005：73.
[3] Loft S，Fischer-Nielsen A，Jeding 1B，et al.8-hydroxydeoxyuanosine as a urinary biomarker of oxidative DNA damage[J].J Toxicol Environ Health，1993，40（2-3）：391-404.
[4] Ishikawa T，Fujioka H，Ishimura T，et al.Increased testicular 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in patients with varicocele[J].BJU Interational，2007，4（100）：863-866.
[5] De Iuliis GN，Thomson LK，Mitchell LA，et al.DNA Damage in Human spermatozoa is highly correlated with the efficiency of chromatin remodeling and the formation of 8-Hydroxy-2'-Deoxyguanosine，a Marker of Oxidative Stress[J].Biology Of Reproduction，2009，3（81）：517-524.
[6] Kao SH，Chao HT，Chen HW，et al.Increase of oxidative stress in human sperm with lower motility[J].Fertility And Sterility，2008，5（89）：1183-1190.
[7] Chen SS，Huang WJ，Chang LS，et al.8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in leukocyte DNA of spermatic vein as a biomarker of oxidative stress in patients with varicocele[J].Journal Of Urology，2004，4（172）：1418-1421. [8] Sakamoto Y，Ishikawa T，Kondo Y，et al.The assessment of oxidative stress in infertile patients with varicocele[J].Biu International，2008，12（101）：1547-1552.
[9] Chen SS，Huang WJ，Chang LS，et al.Attenuation of oxidative stress after varicocelectomy in subfertile patients with varicocele[J].Journal Of Urology，2008，2（179）：639-642.
[10] Seino T，Saito H，Kaneko T，et al.Eight-hydroxy-2'-deoxyguanosine in granulosa cells is correlated with the quality of oocytes and embryos in an in vitro fertilization-embryo transfer program[J].Fertility And Terility，2002，6（77）：1184-1190.
[11] Tamura H，Takasaki A，Miwa I，et al.Oxidative stress impairs oocyte quality and melatonin protects oocytes from free radical damage and improves fertilization rate[J].Journal Of Pineal Research，2008，3（44）：280-287.
[12] 郑全美，郭绍春，何景宏.EllSA方法测定尿8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量及其临床意义[J].中国卫生检验杂志，2002，2（12）：145-146.
[13] 赵燕，郝卫东.8_羟基脱氧鸟苷的生物学意义及其尿中含量的测定方法[J].癌变·畸变·突变，2007，5（19）：418-420.
[15] 鲁燕，陆轶群，李红霞.2型糖尿病患者血清8-羟基脱氧鸟苷酸水平与大血管病变的相关性[J].苏州大学学报（医学版），2007，27（5）：736-738.
[16] 倪少义，郑厚斌，吴献章，等.371例输精管高位结扎术及随访[J].中国实用医药，2009，4（4）：232.
[17] Sakano N，Takahashi N，Wang DH，et al.Plasma 3-nitroty- rosine，urinary 8-isoprostane and 8-OHdG among healthy Japanese people[J].Free Radic Res，2009，3（2）：183-192.
[18] Kato M，Iida M，Goto Y，et al.Sunlight exposure-mediated DNA damage in young adults[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2011，20（8）：1622-1628.
[19] Sato Y，Ogino K，Sakano N，et al.Evaluation of urinary hydrogen peroxide as an oxidative stress biomarker in a healthy Japanese population[J].Free Radic Res，2013，47（3）：181-191.
[20] 武彦文，吴昭昭，陆敏霞，等.长期香烟烟雾吸入对大鼠的慢性毒作用[J].苏州大学学报（医学版）， 2009，29（2）：270-272.
[21] Lodovici M，Casalini C，Cariaggi R，et al.Levels of 8-hydroxydeoxyguanosine as a marker of DNA damage in human leukocytes[J].Free Radic Biol Med，2000，28（1）：13-17.
[22] Ebina S，Chiba T，Zaki T，et al.Relationship between 8-hydroxydeoxyguanosine levels in placental/umbilical cord blood and maternal/neonatal obstetric factors[J].Exp Ther Med，2012，4（3）：387-390.
[22] Galazyn-Sidorczuk M，Brzoska MM，Jurczuk M，et al.Xidative damage to proteins and DNA in rats exposed to cadmium and/or ethanol[J].Chem Biol Interact，2009，180（1）：31-38.
[23] Chen CH，Pan CH，Chen CC，et al.Increased oxidative DNA damage in patients with alcohol dependence and its correlation with alcohol withdrawal severity[J].Alcohol Clin Exp Res，2011，35（2）：338-344.
[24] Yan Y，Yang JY，Mou YH，et al.Possible metabolic pathways of ethanol responsible for oxidative DNA damage in human peripheral lymphocytes[J].Alcohol Clin Exp Res，2011，35（1）：1-9.
[25] 张俊芳，秦柏，杨梅，等.健康人群血浆8-羟基脱氧鸟苷水平及其影响因素[J].江苏医药，2014，3（40）：286-288.
[26] Seino T，Saito H，Kaneko T，et al.Eight-hydroxy-2'-deoxyguanosine in granulosa cells is correlated with the quality of oocytes and embryos in an in vitro fertilization-embryo transfer program[J].Fertility And Terility，2002，6（77）：1184-1190.
[27] Tamura H，Takasaki A，Miwa I，et al.Oxidative stress impairs oocyte quality and melatonin protects oocytes from free radical damage and improves fertilization rate[J].Journal Of Pineal Research，2008，3（44）：280-287.
（收稿日期：2015-05-15）
[关键词] 计划生育；手术；8-羟基脱氧鸟苷
[中图分类号] R699.8 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）15-205-04
[Abstract] Objective To detect the level of 8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine（8-OHdG） in peripheral venous blood and seminal plasma，to study the situation of intracorporal oxidative damage in patients after different surgical methods of vasectomy. Methods To statistical analyze the level of 8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine in peripheral venous blood and seminal plasma of patients after different surgical methods of vasectomy by 8-OHdG enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） in the two groups. Results The level of 8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine in peripheral venous blood and seminal plasma of patients with high vasectomy through the inguinal was lower than which with traditional low vasectomy through the scrotum（P<0.05），while which of different surgical methods of vasectomy in plasma was lower than which in peripheral venous blood（P<0.05）. Conclusion The surgical approach of vasectomy should be selected on higher position as which could decrease the possible DNA oxidative damage.
[Key words] Family planning；Operation；8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine
输精管结扎术（简称男扎术）具有安全、有效、简单、经济等优点[1]，目前常用手术方式主要有两种：经阴囊的传统输精管低位结扎术（本文简称为低位结扎）和经腹股沟的输精管高位结扎术（本文简称为高位结扎）。男性参与计划生育不仅有利于控制家庭规模和降低生育率水平，而且有利于保障育龄妇女生殖健康，进一步改善和提高妇女的社会地位，对家庭和谐、社会稳定及发展有重要作用[2]。本课题通过研究不同术式输精管结扎术术后对象外周静脉血以及精浆中的8-OhdG水平，试图探讨其与并发症发生之间的相互关系，从DNA氧化损伤水平进行研究，期望完善对不同术式输精管结扎术的临床应用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机收集2007年3月～2015年3在揭东县计划生育服务站和广东省计划生育科学技术研究所经阴囊的传统输精管低位结扎术和经腹股沟的输精管高位结扎术术后各60例，年龄25～41岁，平均29岁，手术至今最长时间8年，最短时间2年，根据相关的标准和暴露因素在课题组成员单位中随机收集入组对象，分为经阴囊的传统输精管结扎术和经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象。将经阴囊的传统输精管低位结扎术术后对象定为低位结扎组，经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象定为高位结扎组。
1.2 纳入条件
输精管结扎术术后患者：（1）施行手术二年（含二年）以上；（2）排除性传播性疾病；（3）排除性功能、射精功能障碍。
1.3 设备
ELX-800酶标仪、8-羟基脱氧鸟苷（8-OhdG）特异性单克隆抗体试剂盒。
1.4 方法
用ELX-800酶标仪通过标准曲线计算样品中8-OhdG浓度。本课题通过临床实验研究对经阴囊的传统输精管结扎术和经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象，随机收集各60例，空腹抽取外周静脉血及手淫取精，2000r/min离心10min，留取血清及精浆，-80℃冰箱保存，进行临床试验研究，获得各组人群中的外周静脉血以及精浆中8-OHdG相关水平的参数，了解不同术式输精管结扎术术后对象8-OHdG与并发症的相互关系，从而探索导致男性不育的可能机理。试图探讨其与并发症发生之间的相互关系，从DNA氧化损伤水平进行研究，期望完善对不同术式输精管结扎术的临床应用。
对不同术式输精管结扎术术后对象进行外周静脉血以及精浆中的8-OHdG检测的研究，期望获得相关人群的外周静脉血以及精浆中8-OHdG的相关水平。从分子生物学水平探讨不同术式减少输精管结扎术术后并发症的相关机制。 1.5 统计学处理
数据整理后采用双人双机录入，所有数据采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，计数资料进行x2检验，计量资料采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 精液常规
所有对象精液常规均显示无精子存在，证明输精管结扎手术成功。
2.2 外周静脉血以及精浆中的8-OhdG水平比较
高位结扎术术后对象外周静脉血中8-羟基脱氧鸟苷的水平低于低位结扎术术后对象，差异比较具有统计学意义（P<0.05）；高位结扎术术后对象精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平低于低位结扎术术后对象，比较差异具有统计学意义；外周静脉血以及精浆中的8-OHdG水平比较，见表1。
2.3 两组术后并发症比较
高位结扎术术后对象术后并发症的发生低于低位结扎术术后对象，差异具有统计学意义（P<0.05），两见表2。
3 讨论
分子生物学的研究发现，人类DNA分子中的鸟嘌呤碱基受到活性氧自由基如羟自由基、单线态氧等攻击后，其第8位C原子容易结合-OH而产生一种氧化性加合物8_羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2'-deoxyguanine，8-OHdG），这种DNA氧化损伤产物能够被DNA修复酶剪切清除而经肾脏随尿排泄。在已知的大约20种DNA氧化产物中，8-OHdG生成量相对较高，且不受饮食影响，能用灵敏度较高的分析方法检测，易于检出。由于其与突变明显相关，其含量可以反映机体的DNA氧化损伤程度，已成为目前国际上公认的一种新型的评价机体的DNA氧化损伤和机体氧化应激状态的敏感指标和生物标志物[3]。另外，8-OHdG如果不被机体有效清除，会进而引起DNA复制过程的G-C/A-T型碱基对配对错误而引起基因的点突变以至癌变。
本研究同时使用外周静脉血以及精浆检测8-OHdG水平，结果显示：经腹股沟的输精管高位结扎术术后对象外周静脉血以及精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平均低于经阴囊的传统输精管低位结扎术术后对象，同时输精管结扎高位术后并发症也低于经阴囊的传统输精管低位结扎术术后对象，表明8-OHdG水平升高确实影响术后并发症的发生；两组不同术式术后对象精浆中8-羟基脱氧鸟苷的水平低于外周静脉血中的水平，显示外周静脉血中8-OHdG水平敏感于精浆。
国内外许多资料表明[4-14]，机体8-OHdG含量与癌症、衰老的发生、发展具有一定相关关系。因此，从降低8-OHdG水平出发，建议采用经腹股沟的输精管高位结扎术的手术方法落实男性采取避孕机制，这与本课题组成员之前完成的输精管高位结扎术可以减少输精管结扎术后并发症相一致[15]。但是，近年来国内外有关专家学者研究认为8-OHdG水平亦与年龄、性别以及日照、剧烈运动、吸烟、饮酒、辐射等生活方式有关，而且与年龄、紫外线照射时间、吸烟、饮酒、辐射呈现正相关性关系[16-25]。加之，采用经腹股沟的输精管高位结扎术需要在腹部两侧腹股沟处出现两个切口，日后万一需要行输精管吻合术难度大、成功率低。此外日本Seino T[26]、Tamura H[27]等还发现在体外受精-胚胎移植辅助生殖技术中精液中的8-OHdG水平与卵母细胞受孕率成反比。因此研究外周静脉血以及精浆中的8-OHdG水平在对输精管结扎术术后对象的评估和临床治疗中有着重要意义。因此，建议输精管结扎术采用距离睾丸、附睾较高的位置，不必要一味采用经腹股沟的，完全可以选择经阴囊的距离睾丸、附睾有足够高的位置作为手术入口，这样子可以减少机体8-OHdG含量，同时降低输精管结扎术术后并发症的发生。
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[9] Chen SS，Huang WJ，Chang LS，et al.Attenuation of oxidative stress after varicocelectomy in subfertile patients with varicocele[J].Journal Of Urology，2008，2（179）：639-642.
[10] Seino T，Saito H，Kaneko T，et al.Eight-hydroxy-2'-deoxyguanosine in granulosa cells is correlated with the quality of oocytes and embryos in an in vitro fertilization-embryo transfer program[J].Fertility And Terility，2002，6（77）：1184-1190.
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[15] 鲁燕，陆轶群，李红霞.2型糖尿病患者血清8-羟基脱氧鸟苷酸水平与大血管病变的相关性[J].苏州大学学报（医学版），2007，27（5）：736-738.
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[21] Lodovici M，Casalini C，Cariaggi R，et al.Levels of 8-hydroxydeoxyguanosine as a marker of DNA damage in human leukocytes[J].Free Radic Biol Med，2000，28（1）：13-17.
[22] Ebina S，Chiba T，Zaki T，et al.Relationship between 8-hydroxydeoxyguanosine levels in placental/umbilical cord blood and maternal/neonatal obstetric factors[J].Exp Ther Med，2012，4（3）：387-390.
[22] Galazyn-Sidorczuk M，Brzoska MM，Jurczuk M，et al.Xidative damage to proteins and DNA in rats exposed to cadmium and/or ethanol[J].Chem Biol Interact，2009，180（1）：31-38.
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[24] Yan Y，Yang JY，Mou YH，et al.Possible metabolic pathways of ethanol responsible for oxidative DNA damage in human peripheral lymphocytes[J].Alcohol Clin Exp Res，2011，35（1）：1-9.
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（收稿日期：2015-05-15）