胰蛋白酶抑制剂基因siRNA表达体系的构建

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以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PcR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因KSTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-Tvector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654bp,与已发表的KSTI3基因序列同源性达99%。将反义+正义基因片段插入到pBI12135S启动子下,构建重组质粒pBIKST13。通过冻融法将该重组质粒转入农杆菌EHA105中,获得了siRNA表达体系。利用农杆菌介导法将带有pBIKSTI3的菌株转化大豆,从2棵再生植株中得到2100bp的特异性扩增条带
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