【摘 要】
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目的 观察应用RNA干扰(RNAi)技术敲低PIK3R1、AKT1表达后在体外对胃腺癌SGC7901细胞侵袭的抑制作用.方法 将重组腺病毒质粒表达载体rAd5-A-P转染至SGC7901细胞.Realtime PCR和Western blot分别检测转染前后目的 基因mRNA和蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的浓度变化.划痕、Tran
【机 构】
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目的 观察应用RNA干扰(RNAi)技术敲低PIK3R1、AKT1表达后在体外对胃腺癌SGC7901细胞侵袭的抑制作用.方法 将重组腺病毒质粒表达载体rAd5-A-P转染至SGC7901细胞.Realtime PCR和Western blot分别检测转染前后目的 基因mRNA和蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的浓度变化.划痕、Transwell、3-DMatrigel基质生长实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果 rAd5-A-P可以有效抑制PIK3R1、AKT1的表达,MMP-2、MMP-9表达下调,基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2表达上调,ELISA证实细胞外MM9-2、MMP-9浓度在治疗组明显减低.划痕实验显示rAd5-A-P转染组细胞转移运动能力明显减弱,Transwell穿过细胞数结果:对照组(105.0±4.0)和无义序列组(102.5±6.4),rAd5-A-P转染组(67.0±3.9),3-D的Matrigel基质生长实验显示与对照组和无义序列组比较,rAd5-A-P转染组细胞形成的细胞团块较小.结论 靶向AKT1、PIK3R1的RNAi技术可以序列特异性地抑制PIK3R1、AKT1表达,在体外明显抑制SGC7901细胞的侵袭能力。
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