【摘 要】
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目的 观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)的突变启动子启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)发光强度的变化情况.方法 应用PCR引入突变方法获得hTERT游序列长约300bp的启动子片段,包括单
【机 构】
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辽宁医学院基础学院生化教研室,辽宁,锦州,121000
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目的 观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)的突变启动子启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)发光强度的变化情况.方法 应用PCR引入突变方法获得hTERT游序列长约300bp的启动子片段,包括单增强子(E-box)突变序列(2个);双E-box突变序列;单转录因子特异蛋白1(Spl)结合位点突变序列(5个);Spl结合位点全部(Spl-5)突变序列,分别克隆人无启动子的绿色荧光蛋白EGFP的基因上游,稳转入SW579细胞中,观察细胞EGFP的发光强度.结果 除了约-110bp的单Spl突变对EGFP的启动效率影响不大之外,任何一种E-box或Spl突变的启动子均显示启动效率不同程度的下降,其中双E-box突变的启动子和5个SPl结合位点均突变的启动子启动绿色荧光蛋白的表达强度明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 转染人端粒酶启动子突变基因,能够抑制SW579细胞EGFP的发光效率,证明人端粒酶启动子的E-box序列、SPl结合序列对启动子的启动效率密切相关,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗提供了基础依据.
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