【摘 要】
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采用异硫氰酸胍（GuSCN）和硅藻从B95—8细胞中快速抽提模板DNA。根据EB病毒（EBV）B95—8株DNA全序列及编码EBV胸苷激酶（TK）的开放读框BXLF1的结构，设计合成一对引物，并在引物的5’一端
【机 构】
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中山医科大学肿瘤研究所,中山医科大学生化教研室
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采用异硫氰酸胍（GuSCN）和硅藻从B95—8细胞中快速抽提模板DNA。根据EB病毒（EBV）B95—8株DNA全序列及编码EBV胸苷激酶（TK）的开放读框BXLF1的结构，设计合成一对引物，并在引物的5’一端分别引入EcoRⅠ和PstⅠ切点。用PCR技术扩增出一含完整EBVTK基因的1.843KbDNA片段，NcoI酶切分析鉴定。EcoR1/PstI酶切PCR产物和载体，使目的基因定向克隆至选定质粒pBV221中。转化大肠杆菌HB101，涂布氨苄平板，小规模碱裂解法快速制备质粒DNA．电泳筛选阳性克隆，EcoRⅠ／PstⅠ单酶切和双酶切进行鉴定。
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