观察瘦素对大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)蛋白激酶-B(Akt)、磷酸化蛋白激酶-B(Pho-Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3(caspase-3)的表达及细胞凋亡的影响,探讨瘦素影响ASMC凋亡的可能机制。
方法体外培养大鼠ASMC,按随机数字表法分为空白对照组、瘦素50 μg/L组(Lep50组)、瘦素100 μg/L组(Lep100组)、瘦素200 μg/L组(Lep200组)及瘦素200 μg/L +LY294002组[1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂组]。各组均孵育24 h后用Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,Western blot测定Akt、Pho-Akt、Bcl-2、Bax和caspase-3的蛋白表达情况。
结果Lep50组、Lep100组、Lep200组的细胞凋亡率分别为(3.97±0.39)%、(1.88±0.72)%和(0.77±0.11)%,均低于空白对照组的(7.38±0.49)%(F=89.57,P<0.05),且各组细胞凋亡率与瘦素浓度呈负相关(r=-0.711,P<0.05);PI3K抑制剂组凋亡率为(3.29±0.36)%,高于Lep200组(F=89.57,P<0.01)。Western blot结果显示随着瘦素浓度的升高Bcl-2表达增加,且与浓度呈正相关(r=0.939,P<0.05),Bax和caspase-3表达下降,与瘦素浓度成负相关(r值分别为-0.908和-0.961,均P<0.05),Bcl-2/Bax比值增加(F=20.56,P<0.05),Pho-Akt表达上调,且与瘦素浓度呈正相关(r=0.958,P<0.05);PI3K抑制剂组较Lep200组Pho-Akt、Bcl-2表达下降(F值分别为32.93和19.48,均P<0.05),Bax和caspase-3表达升高(F值分别为10.10和29.86,均P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(F=20.56,P<0.05)。
结论瘦素可以抑制ASMC的凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt通路有关。