【摘 要】
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为了解内蒙古自治区伪狂犬病毒(PRV)的流行变异情况,本研究从内蒙古某猪场采集疑似患猪伪狂犬病(PR)的猪脑组织,处理后采用PRV gE基因特异性引物经PCR鉴定后将阳性样品分别接种MDBK细胞和Vero细胞,分别进行病毒的分离,对分离的病毒测定病毒含量(TCID50).PCR结果显示,组织样品为PRV野毒感染.病料样品接种MDBK细胞和Vero细胞盲传4代后均产生明显的细胞病变,病毒含量为108.8 TCID50/mL.表明分离到1株PRV,命名为HS01株.采用PCR分别扩增分离病毒的gE、gC和TK
【机 构】
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内蒙古大学省部共建草原家畜生殖调控与繁育国家重点实验室,内蒙古呼和浩特010070;南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;中牧实业股份有限公司,北京100070;内蒙古大学省部共建草原家畜生殖
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为了解内蒙古自治区伪狂犬病毒(PRV)的流行变异情况,本研究从内蒙古某猪场采集疑似患猪伪狂犬病(PR)的猪脑组织,处理后采用PRV gE基因特异性引物经PCR鉴定后将阳性样品分别接种MDBK细胞和Vero细胞,分别进行病毒的分离,对分离的病毒测定病毒含量(TCID50).PCR结果显示,组织样品为PRV野毒感染.病料样品接种MDBK细胞和Vero细胞盲传4代后均产生明显的细胞病变,病毒含量为108.8 TCID50/mL.表明分离到1株PRV,命名为HS01株.采用PCR分别扩增分离病毒的gE、gC和TK基因并进行同源性、遗传进化及主要氨基酸位点的变异分析.结果 显示,HS01株gE、gC、TK基因序列与2011年后国内变异株相应基因的同源性分别为96.9％ ～99.7％、97.6％～99.6％和99.7％～100％;且他们的系统进化树结果显示,PRV HS01株与国内变异株属于同一分支,而与国内经典株遗传距离较远(gE、gC基因),或与部分国内经典株属于同一分支(TK基因),与同源性分析结果基本相符;HS01株gE基因在aa48和aa492各插入一个天冬氨酸,符合PRV变异株的特点.上述结果均表明,HS01为一株PRV变异株.将该株病毒经滴鼻接种豚鼠,进行致病力试验.结果 显示接种12h后豚鼠出现食欲不振、精神沉郁、瘙痒等临床症状,并于接种后66 h出现死亡.将感染组存活豚鼠迫杀后显示肺脏出血、充血,表明HS01株对豚鼠有致病性,并能致其死亡.本研究首次在内蒙古地区猪场分离到PRV变异株,并进行了豚鼠的致病力研究,为内蒙古自治区PRV新流行株遗传变异机制的研究及新型疫苗研发提供参考.
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