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【摘要】 目的：研究复方一枝蒿片的体内外抗菌作用。方法：采用体内和体外抗菌实脸，研究复方一枝蒿片的抗菌作用。结果：复方一枝蒿片在体外能够明显地抑制和杀灭金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌，同时对乙型溶血性链球菌有抑制和杀灭作用，对大肠杆菌（Escherichia coli）无抑制和杀灭作用；在体内能够显著降低变形杆菌感染小鼠的死亡率，但对大肠杆菌感染小鼠的死亡率没有显著作用。结论： 复方一枝蒿片在体内、外均具有良好的抗菌作用。
【关键词】 复方一枝蒿片； 抗菌作用； 体内、外实验
复方一枝蒿片为江苏黄河药业股份有限公司研制、生产的新型中草药成品，其主要成分为一枝蒿、板蓝根和大青叶，按照维医理论，其具有清除“乃孜来”，解毒利咽，用于“乃孜来”所致的感冒、发烧、咽喉肿痛的功效；在中医学中其具有解表祛风、凉血解毒的疗效。常用于邪毒所致的感冒发烧、咽喉肿痛、病毒性感冒见上述证候者。相对于复方一枝蒿颗粒，该产品能够克服颗粒剂用辅料用量大、服用需用开水冲服、口味不佳等缺点。为了进一步开发复方一枝蒿片，笔者对其在抗菌方面的药效作用进行了研究，以期为复方一枝蒿片的临床应用进一步提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 紫外分光光度计（UV-2201）：日本岛津公司；台式高速冷冻离心机（5417R）：艾本德中国有限公司（Eppendorf China Limited）；电子分析天平（AG-204）：瑞士Mettler Toledo公司；电热恒温培养箱（DNP-9082）：上海精宏实验设备有限公司；洁净工作台（SW-CJ）：上海屹明净化设备有限公司。
1.1.2 试药 地塞米松（湖北潜江制药股份有限公司）；MH肉汤培养基和MH琼脂培养基（上海微晶生物技术有限公司）；双黄连口服液（河南福森药业有限公司）；复方一枝蒿片（江苏黄河药业股份有限公司，实验前用灭菌蒸馏水溶解配成所需浓度）；MH血清肉汤培养基和MH血琼脂平板培养基（分别为肉汤加灭活小牛血清，琼脂培养基加脱纤维羊血）由本室制备。
1.1.3 动物及菌种 Balb/c小鼠300只，雌雄兼半，6～7周龄，购自上海斯莱克动物公司；金黄色葡萄球菌ATCC 25923；大肠杆菌 ATCC 58922由江苏省药品检验所提供；肺炎链球菌 ATCC 49619；乙型溶血性链球菌ATCC 6305。
1.2 方法
1.2.1 体外抗菌实验 采用试管法测最低抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）研究复方一枝蒿片的体外抗菌研究[1-3]。
1.2.1.1 试验菌准备 取复苏的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大肠杆菌（Escherichia coli）MH肉汤24 h培养物分别接种至MH肉汤，37 ℃ 孵育6 h；取复苏的肺炎链球菌（Pseudomonas aureginosa）和乙型溶血性链球菌（Streptococcus hemolytic-β）MH血清肉汤 24 h培养物分别接种至MH血清肉汤，37 ℃，6 h；分别取上述4种菌6 h培养液，用麦氏比浊法调至109/mL，再作100倍稀释至107/mL，将107/mL定为工作浓度。通过倾注平板作菌落计数，最终确定每1 mL液体培养基中加入0.1 mL菌液。
1.2.1.2 复方一枝蒿水溶液制备 取复方一枝蒿片5 g加15 mL灭菌蒸馏水中，通过超声处理，使复方一枝蒿片充分溶解，用1 % NaOH调至pH 7.0，用0.5 μm滤器滤过除菌，呈棕黄色透明液体。
1.2.1.3 抗菌实验 复方一枝蒿水溶液1 mL，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌用MH肉汤，乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌用MH血清肉汤分别作倍比稀释至第10管，第11管为菌液对照，第12管为MH肉汤无菌对照。1～10管药液稀释度分别为1：2，1：4～1：1024，共4排。每排1～11管分别加入4种试验菌液0.1 mL，第12管不加菌液，为MH肉汤无菌对照，37 ℃，24 h，观察结果。
2 结果
MH肉汤结果显示金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌感染的肉汤都有一定程度的变澄清，复方一枝蒿片对、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌有抑制和杀灭作用，见表1。MH平板结果见表2。
3 讨论
上述研究显示，复方一枝蒿片剂能够明显抑制和杀灭金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌，对乙型溶血性链球菌有一定的抑制和杀灭作用，而对大肠杆菌无作用。同为上呼吸道感染常见病原菌的金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌都可以被复方一枝蒿片所抑制和杀灭，这可以解释临床上常用复方一枝蒿片治疗咽炎、喉炎和气管炎等上呼吸道感染的原因。上述三种病原菌均为革兰阳性球菌，而大肠杆菌属于革兰阴性菌，而革兰阳性球菌和革兰阴性菌具有不同的细胞壁结构[6]，复方一枝蒿片对前述各菌抑制和杀灭作用的确切作用机制是否与其阻止细胞壁合成有关[7]，还有待于进一步研究。复方一枝蒿片对大肠杆菌感染小鼠死亡的保护作用不显著，但是高剂量的复方一枝蒿片能使变形杆菌感染小鼠的死亡率显著下降，表明复方一枝蒿片对感染的小鼠具有明显的保护作用。综上所述，一枝蒿片具有良好的抗菌作用，但其作用机制未知，有待于进一步研究。
参考文献
[1] 刘锡光.现代诊断微生物学[M]. 北京：人民卫生出版社， 2002：688-703.
[2] 张炳华，王亚男，张彦琼.复方一枝蒿颗粒剂的体外抗菌作用[J].中国现代医学杂志， 2005， 15（13）： 1968-1969.
[3] 黄庆，方芸.复方荔枝草颗粒体内外抗菌消炎作用研究[J].中国药房， 2008， 19（9）： 657-658.
[4] 徐叔云，卞如滚，陈修. 药理实验方法学[M]. 第3 版. 北京： 人民卫生出版社，2003 ：1657-1666.
[5] 常翠，董淳，杨宏图，等.清喉口含片动物体内、外抑菌实验研究[J].中国药房，2006，17（5）：336.
[6] 沈关心.微生物学与免疫学[M].第5版. 北京：人民卫生出版社， 2003：127.
[7] 周正任， 李凡.医学微生物学[M].第6版.北京：人民卫生出版社， 2003： 7- 9.
（收稿日期：2013-08-29） （本文编辑：陈丹云）
【关键词】 复方一枝蒿片； 抗菌作用； 体内、外实验
复方一枝蒿片为江苏黄河药业股份有限公司研制、生产的新型中草药成品，其主要成分为一枝蒿、板蓝根和大青叶，按照维医理论，其具有清除“乃孜来”，解毒利咽，用于“乃孜来”所致的感冒、发烧、咽喉肿痛的功效；在中医学中其具有解表祛风、凉血解毒的疗效。常用于邪毒所致的感冒发烧、咽喉肿痛、病毒性感冒见上述证候者。相对于复方一枝蒿颗粒，该产品能够克服颗粒剂用辅料用量大、服用需用开水冲服、口味不佳等缺点。为了进一步开发复方一枝蒿片，笔者对其在抗菌方面的药效作用进行了研究，以期为复方一枝蒿片的临床应用进一步提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 紫外分光光度计（UV-2201）：日本岛津公司；台式高速冷冻离心机（5417R）：艾本德中国有限公司（Eppendorf China Limited）；电子分析天平（AG-204）：瑞士Mettler Toledo公司；电热恒温培养箱（DNP-9082）：上海精宏实验设备有限公司；洁净工作台（SW-CJ）：上海屹明净化设备有限公司。
1.1.2 试药 地塞米松（湖北潜江制药股份有限公司）；MH肉汤培养基和MH琼脂培养基（上海微晶生物技术有限公司）；双黄连口服液（河南福森药业有限公司）；复方一枝蒿片（江苏黄河药业股份有限公司，实验前用灭菌蒸馏水溶解配成所需浓度）；MH血清肉汤培养基和MH血琼脂平板培养基（分别为肉汤加灭活小牛血清，琼脂培养基加脱纤维羊血）由本室制备。
1.1.3 动物及菌种 Balb/c小鼠300只，雌雄兼半，6～7周龄，购自上海斯莱克动物公司；金黄色葡萄球菌ATCC 25923；大肠杆菌 ATCC 58922由江苏省药品检验所提供；肺炎链球菌 ATCC 49619；乙型溶血性链球菌ATCC 6305。
1.2 方法
1.2.1 体外抗菌实验 采用试管法测最低抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）研究复方一枝蒿片的体外抗菌研究[1-3]。
1.2.1.1 试验菌准备 取复苏的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大肠杆菌（Escherichia coli）MH肉汤24 h培养物分别接种至MH肉汤，37 ℃ 孵育6 h；取复苏的肺炎链球菌（Pseudomonas aureginosa）和乙型溶血性链球菌（Streptococcus hemolytic-β）MH血清肉汤 24 h培养物分别接种至MH血清肉汤，37 ℃，6 h；分别取上述4种菌6 h培养液，用麦氏比浊法调至109/mL，再作100倍稀释至107/mL，将107/mL定为工作浓度。通过倾注平板作菌落计数，最终确定每1 mL液体培养基中加入0.1 mL菌液。
1.2.1.2 复方一枝蒿水溶液制备 取复方一枝蒿片5 g加15 mL灭菌蒸馏水中，通过超声处理，使复方一枝蒿片充分溶解，用1 % NaOH调至pH 7.0，用0.5 μm滤器滤过除菌，呈棕黄色透明液体。
1.2.1.3 抗菌实验 复方一枝蒿水溶液1 mL，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌用MH肉汤，乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌用MH血清肉汤分别作倍比稀释至第10管，第11管为菌液对照，第12管为MH肉汤无菌对照。1～10管药液稀释度分别为1：2，1：4～1：1024，共4排。每排1～11管分别加入4种试验菌液0.1 mL，第12管不加菌液，为MH肉汤无菌对照，37 ℃，24 h，观察结果。
2 结果
MH肉汤结果显示金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌感染的肉汤都有一定程度的变澄清，复方一枝蒿片对、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌有抑制和杀灭作用，见表1。MH平板结果见表2。
3 讨论
上述研究显示，复方一枝蒿片剂能够明显抑制和杀灭金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌，对乙型溶血性链球菌有一定的抑制和杀灭作用，而对大肠杆菌无作用。同为上呼吸道感染常见病原菌的金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌都可以被复方一枝蒿片所抑制和杀灭，这可以解释临床上常用复方一枝蒿片治疗咽炎、喉炎和气管炎等上呼吸道感染的原因。上述三种病原菌均为革兰阳性球菌，而大肠杆菌属于革兰阴性菌，而革兰阳性球菌和革兰阴性菌具有不同的细胞壁结构[6]，复方一枝蒿片对前述各菌抑制和杀灭作用的确切作用机制是否与其阻止细胞壁合成有关[7]，还有待于进一步研究。复方一枝蒿片对大肠杆菌感染小鼠死亡的保护作用不显著，但是高剂量的复方一枝蒿片能使变形杆菌感染小鼠的死亡率显著下降，表明复方一枝蒿片对感染的小鼠具有明显的保护作用。综上所述，一枝蒿片具有良好的抗菌作用，但其作用机制未知，有待于进一步研究。
参考文献
[1] 刘锡光.现代诊断微生物学[M]. 北京：人民卫生出版社， 2002：688-703.
[2] 张炳华，王亚男，张彦琼.复方一枝蒿颗粒剂的体外抗菌作用[J].中国现代医学杂志， 2005， 15（13）： 1968-1969.
[3] 黄庆，方芸.复方荔枝草颗粒体内外抗菌消炎作用研究[J].中国药房， 2008， 19（9）： 657-658.
[4] 徐叔云，卞如滚，陈修. 药理实验方法学[M]. 第3 版. 北京： 人民卫生出版社，2003 ：1657-1666.
[5] 常翠，董淳，杨宏图，等.清喉口含片动物体内、外抑菌实验研究[J].中国药房，2006，17（5）：336.
[6] 沈关心.微生物学与免疫学[M].第5版. 北京：人民卫生出版社， 2003：127.
[7] 周正任， 李凡.医学微生物学[M].第6版.北京：人民卫生出版社， 2003： 7- 9.
（收稿日期：2013-08-29） （本文编辑：陈丹云）