探讨创面局部注射兔脂肪源性间充质干细胞(ADSC)对兔皮肤深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响。
方法取1只新西兰大白兔脂肪组织，分离ADSC，并进行传代培养，采用第3代细胞进行以下实验。将24只兔按照随机数字表法分为ADSC组12只和对照组12只，在兔背部近臀部两侧各造成1个直径约5 cm深Ⅱ度烫伤创面。于伤后第2天起ADSC组兔创面皮下注射2 mL经EdU标记的ADSC悬液(浓度为5×105个/mL)，对照组兔创面同前注射2 mL无血清DMEM培养液，至创面愈合。每日观察2组兔创面愈合情况，记录其愈合时间。伤后第7、14、21、28天，2组各取3只兔，测量创面面积并计算愈合率；切取创面愈合组织，HE染色观察组织形态，Masson染色观察胶原纤维表达。倒置荧光显微镜下观察EdU标记的ADSC在伤后第28天创面愈合组织中的分布，ELISA法检测伤后第7、14、21天创面愈合组织中血管内皮生长因子(VEGF)及EGF表达。对数据行析因设计方差分析、配对样本t检验。
结果(1)ADSC组兔创面愈合时间为伤后(19.5±1.1)d，明显短于对照组的(23.3±1.5)d，t＝4.50，P<0.05。伤后第7天，2组兔创面均干燥，无明显渗出物，创周红肿逐渐消退；ADSC组兔创面愈合率为(15.1±2.4)%，与对照组的(13.7±3.1)%相近(t＝1.20，P>0.05)。伤后第14天，ADSC组兔创面干燥、结痂明显，创面愈合率为(73.1±5.7)%；对照组兔创面有少量分泌物、少量结痂，创面愈合率为(52.9±5.1)%，明显低于ADSC组(t＝8.06，P<0.01)。伤后第21天，ADSC组兔创面基本愈合，创面愈合率为(95.6±3.0)%；对照组兔仍有少量创面存在，创面愈合率为(78.6±3.7)%，明显低于ADSC组(t＝9.73，P<0.01)。伤后第28天，2组兔创面均完全愈合，愈合率100%，ADSC组兔创面愈合皮肤组织质地及微血管反应优于对照组。(2)伤后第7天，2组兔创面愈合组织Fb增多，均有少量血管、胶原纤维增生，无明显差别。伤后第14天，ADSC组兔创面愈合组织Fb数量多于对照组，胶原纤维排列密集整齐；对照组兔创面愈合组织胶原纤维排列稀疏不规则。伤后第21天，2组兔创面愈合组织表皮层均有分化，ADSC组兔创面愈合组织胶原纤维仍较对照组密集。伤后第28天，ADSC组兔创面愈合组织新生表皮各个层次分化良好，优于对照组；2组兔创面愈合组织中均有大量粗大胶原纤维排列；ADSC组兔创面愈合组织中可见EdU标记的ADSC。(3)伤后第7天，ADSC组兔创面愈合组织VEGF及EGF表达与对照组相近(t值分别为0.70和0.91，P值均大于0.05)。伤后第14、21天，ADSC组兔创面愈合组织VEGF及EGF表达明显多于对照组(t值为2.85～4.81，P值均小于0.01)。
结论ADSC移植对兔皮肤深Ⅱ度烫伤创面愈合有明显促进作用，能缩短创面愈合时间。