【摘 要】
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目的应用噬菌体展示技术构建钠泵抑制物单链抗体库. 方法用OUA-OVA(ouabain-ovalbumin)免疫小鼠,取脾脏,分离淋巴细胞,提取mRNA,逆转录成cDNA第一链,用简并引物经PCR分别扩增
【机 构】
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西安交通大学第一医院心脏内科,第四军医大学生物化学教研室
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目的应用噬菌体展示技术构建钠泵抑制物单链抗体库. 方法用OUA-OVA(ouabain-ovalbumin)免疫小鼠,取脾脏,分离淋巴细胞,提取mRNA,逆转录成cDNA第一链,用简并引物经PCR分别扩增轻、重链抗体库,经重叠延伸PCR由Linker将轻、重链拼接成ScFv (单链抗体),用RS引物以ScFv 为模板进行第2次PCR, 同时在5及3端分别加上SfiI, NotI酶切位点. 经SfiI, NotI酶切后, 在T4连接酶的作用下将ScFv与pCANTAB 5E噬菌粒连接,电转化进入TG1大
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