【摘 要】
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大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)和虹鳟性腺细胞(Rainbow trout gonad cells,RTG-2)是传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)检测的国家标准所推荐使用的鲑鳟鱼源细胞系.本研究选用24株IPNV毒株,以1 000倍半数组织培养物死亡剂量(50％tissue culture infective dose,TCID50)分别接种于CHSE-214和RTG-2
【机 构】
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大连海洋大学,辽宁大连116023;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江省水生动物病害与免疫重点实验室,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江省水生动物病害与免疫重
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大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)和虹鳟性腺细胞(Rainbow trout gonad cells,RTG-2)是传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)检测的国家标准所推荐使用的鲑鳟鱼源细胞系.本研究选用24株IPNV毒株,以1 000倍半数组织培养物死亡剂量(50％tissue culture infective dose,TCID50)分别接种于CHSE-214和RTG-2细胞,以细胞病变情况比较这两种细胞对IPNV的敏感性.将IPNV以10 TCID50和 100 TCID50接种在筛选出的最敏感细胞系上,每天观察细胞的病变及变化,收获病毒培养物.利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)及病毒滴度测定法分析IPNV在敏感细胞上的增殖状况.结果显示,接毒后7 d时,全部毒株均能在CHSE-214细胞上增殖,并导致细胞病变,而仅有8株IPNV能在RTG-2细胞上增殖,导致细胞病变,表明CHSE-214细胞对IPNV的敏感性高于RTG-2细胞.利用RT-qPCR和TCID50法分析IPNV在CHSE-214上的增殖情况发现,随着接毒时间的增加,病毒量整体呈现先升高后降低的趋势,接毒后3 d时达到最大值.该增殖趋势均出现在不同接毒剂量组,除接毒后1 d时,其余各时间点10 TCID50剂量组的病毒量均显著高于100 TCID50剂量组(P＜0.05).本研究结果表明,CHSE-214细胞比RTG-2更适合用于IPNV的体外分离培养,且在多数细胞出现典型细胞病变而尚未完全脱落时病毒含量最高,此时适合收集病毒培养物进行病毒检测.本研究可为IPNV的检测提供科学指导.
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