论文部分内容阅读
目的探讨儿童松质骨成骨细胞体外培养条件,为儿童骨组织工程研究选择种子细胞.方法均取自先天性髋脱位患儿加盖手术时多余髂骨,术前证实患儿无代谢性骨病,未服激素类等药物.取材在手术时进行,男1例,女3例,年龄3～7岁.骨块保持无菌,置于无血清培养液中,4℃冰箱存放,2～4 h内分离骨细胞.将髂骨松质骨剪碎成骨粒,经胰蛋白酶初步消化后,采用胶原酶Ⅱ分次消化法,获取原代成骨细胞,将原代成骨细胞置于含15%胎牛血清的DMEM-F12培养基中培养,经传代、纯化后,绘制细胞生长曲线.成骨细胞的鉴定采用改良Gomori碱性磷酸酶(ALP)钙钴法染色、ABC法Ⅰ、Ⅲ型胶原染色及放射免疫法测定骨钙素含量.培养期间应用倒置相差显微镜观察细胞形态.结果经酶消化法得到的儿童成骨细胞,呈梭形,较饱满.原代细胞胞体较小,传代后可呈多角形、梭形或不规则形,胞浆内可出现黑色颗粒.ALP染色阳性率45%.初次酶消化后的松质骨块经培养后,还可以多次消化得到更加纯化的成骨细胞.结论采用胰蛋白酶及胶原酶的多次消化法获取原代细胞,经培养、传代后,可得到较为稳定、纯化的儿童松质骨成骨细胞.