为建立检测鸭肝炎病毒(DHV)的PCR-ELISA方法,根据DHV VP1基因序列设计1对分别标记生物素和地高辛的引物,采用固相杂交法,将生物素标记的探针固定在酶标板上,再与地高辛标记的产物进行杂交,并通过反复优化确定了10 mg/m L链霉亲和素包被液、10 g/L BSA封闭液、0.5 pmol/L探针、1∶4 000稀释的酶标二抗及最适杂交时间等最佳反应条件,建立了DHV PCR-ELISA检测方法。该方法与鸭肠炎病毒、鸭细小病毒和鸭疫里氏杆菌等无交叉反应,说明该方法特异性强;敏感性试验结果表明,PCR-ELISA最低能检出0.37 pg/L的DHV RNA,其敏感度比常规PCR高100倍。用该方法对50份雏鸭肝提取的RNA样本进行检测,阳性检出率为82%,较RT-PCR检出率高46%。结果表明,该PCR-ELISA方法具有特异、敏感、安全的特点,从而为鸭病毒性肝炎流行病学研究及临床诊断提供了新的途径。