αA晶状体蛋白磷酸化对人晶状体上皮细胞抗氧化和抗凋亡能力的影响

来源 :中华眼科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：xiangsyy

【摘要】

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目的研究αA晶状体蛋白特定氨基酸位点磷酸化对人晶状体上皮细胞（HLEC）抗氧化及抗凋亡能力的影响。方法实验研究。利用基因定点突变技术，将αA晶状体蛋白第45位、66位、122位丝氨酸分别突变为天冬氨酸以模拟磷酸化，导入pEGFP-C1质粒并经脂质体转染HLEC作为实验组（即S45D组、S66D组、S122D组），转染空质粒以及过表达野生型（WT）αA晶状体蛋白的HLEC分别为空白对照组和WT组。经

【作者】

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叶鸿飞周鹏竺向佳蔡蕾张可可樊琪卢奕

【机构】

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200031　上海，复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科,200031　上海，复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科,200031　上海，复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科,200031　上海，复旦大学附属眼耳鼻喉科医

【出处】

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中华眼科杂志

【发表日期】

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2015年51期

【关键词】

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晶体上皮细胞活性氧细胞凋亡晶体蛋白质类

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目的

研究αA晶状体蛋白特定氨基酸位点磷酸化对人晶状体上皮细胞（HLEC）抗氧化及抗凋亡能力的影响。

方法

实验研究。利用基因定点突变技术，将αA晶状体蛋白第45位、66位、122位丝氨酸分别突变为天冬氨酸以模拟磷酸化，导入pEGFP-C1质粒并经脂质体转染HLEC作为实验组（即S45D组、S66D组、S122D组），转染空质粒以及过表达野生型（WT）αA晶状体蛋白的HLEC分别为空白对照组和WT组。经H₂O₂诱导后，分别应用超氧化物阴离子荧光探针和Annexin V-PE/7AAD双染法检测各组细胞的活性氧水平及凋亡率。两组间参数的比较采用两样本均数比较的t检验或Wilcoxon秩和检验，多组间比较采用随机区组设计的方差分析或Kruskal-Wallis检验。

结果

转染模拟磷酸化αA晶状体蛋白的3组细胞超氧化物阴离子平均荧光亮度分别为167.53±18.21，143.54±4.78和143.40±30.19，较空白组（274.42±3.71）显著下降（t=9.963, P=0.001；t=34.961, P<0.01；Z=1.993, P= 0.046），与WT组（192.67±1.47）亦存在差异（Z=1.964, P=0.049；t=17.887, P<0.01；Z=1.964, P=0.049）；H₂O₂诱导的细胞凋亡后，模拟αA晶状体蛋白磷酸化的细胞组早期凋亡率分别为15.08%±0.90%，16.59%±5.37%和15.36%±2.62%，较空白组（41.28%±2.70%;t=21.632, P<0.01；t=8.855, P<0.01；t= 15.450, P<0.01）及WT组（31.40%±1.64%）显著下降（t=15.117, P<0.01；t=4.524, P=0.006；t=8.988, P= 0.001）。3组实验组间相比活性氧水平及早期凋亡率均无明显差异（F=1.08, P=0.407；x²=4.345, P= 0.114）。