诱生型一氧化氮合酶FAD结合区的克隆、表达和活性鉴定

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诱生型的一氧化氮合酶(iNOS)的表达可以被多种细胞因子、IPS、多种试剂及创伤等诱导,很多疾病的产生发展都与iNOS的过度表达有关.为进一步研究iNOS FAD结合区的功能和特异性抑制肽的筛选,用PCR方法克隆出iNOS FAD结合区编码基因片段(iNOS2031-2660bp),并在大肠杆菌中得到高效表达,得到表达率>30%的包涵体;经过Ni金属螯合亲和柱层析和电泳纯化,得到纯度>95%的重组蛋白,相对分子质量为23 000.运用波长扫描,证实纯化蛋白具有与FAD的结合活性,它可以作为筛选iNOS特异性抑制肽的靶蛋白.
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