【摘 要】
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为建立犬细环病毒(TTCV)的快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的TTCV ORF7基因设计合成一对特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了检测TTCV的SYBR Green Ⅰ荧
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;广西大学动物科技学院,广西南宁530004;军事医
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为建立犬细环病毒(TTCV)的快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的TTCV ORF7基因设计合成一对特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了检测TTCV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.结果显示:建立的荧光定量PCR方法Ct值与标准品模板在5.82×109拷贝/μL～5.82× 103拷贝/μL范围内呈良好的线性关系.该检测方法仅对TTCV检测为阳性,而对狂犬病病毒、犬冠状病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬副流感病毒均无特异扩增;该检测方法灵敏度可达5.82×103拷贝/μL.对27份犬血清样品检测结果显示,建立的荧光定量PCR阳性检测率为11.11％,而普通PCR方法检测阳性率为3.7％.本实验建立了TTCV SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR检测方法,对TTCV诊断及致病机制的研究提供了高通量的定量检测方法.
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