人脂肪间充质干细胞体外向黑素细胞分化的研究

来源 :中华皮肤科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:stanley45518501
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目的 建立体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSC)向黑素细胞分化的方法.方法 由人皮下脂肪分离培养获得hADSC,流式细胞仪检测细胞表型,成骨成脂分化证明分化潜能.将干细胞生长因子(SCF)、内皮素3(EDN-3)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等加到条件培养基中,促使第5代hADSC向黑素细胞方向诱导,诱导至第10周.未诱导组为正常对照组.使用实时荧光定量PCR检测黑素相关基因小眼畸形转录因子(MITF),酪氨酸激酶受体c-Kit(KIT),多巴色素异构酶(DCT),酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1),性别决定区域相关转录因子10(SOX10) mRNA的表达量,统计学分析采用单因素方差分析及LSD-t检验.诱导结束后,通过免疫细胞化学法、细胞免疫荧光法进行鉴定.结果 流式细胞仪显示分离培养获得的hADSC高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,阳性率均在95%以上;低表达或不表达CD31、CD34、CD45,人白细胞DR抗原(HLA-DR).成骨成脂分化结果显示hADSC具有分化潜能.实时荧光定量PCR结果显示,诱导10周后,MITF、KIT、DCT、TYR、TYRP1、SOX10 mRNA的表达水平分别为0.325±0.012,0.042±0.006,0.046±0.013,0.036±0.005,0.041±0.003,0.225±0.014,与诱导0周组相比,均有上调(P<0.05).诱导结束后,免疫细胞化学MITF、HMB45染色阳性,细胞免疫荧光TYRP1、S100阳性表达.结论 由人脂肪间充质干细胞诱导所得细胞具有一定的黑素细胞生物学特性。

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