【摘 要】
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目的 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒载体pLNCX2-GFP,用GFP对神经干细胞进行标记示踪.方法应用基因克隆的方法,制备pLNCX2-GFP,借助阳离子脂质体转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆,获取病毒上清;从胚胎大鼠脑中解剖分离和培养神经干细胞,用病毒上清感染大鼠胚胎神经干细胞.结果经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了重组GFP逆转录病毒,pLNCX2-GFP转染包
【机 构】
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200040,上海,复旦大学附属华山医院神经外科,200040,上海,复旦大学附属华山医院神经外科,200040,上海,复旦大学附属华山医院神经外科
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目的 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒载体pLNCX2-GFP,用GFP对神经干细胞进行标记示踪.方法应用基因克隆的方法,制备pLNCX2-GFP,借助阳离子脂质体转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆,获取病毒上清;从胚胎大鼠脑中解剖分离和培养神经干细胞,用病毒上清感染大鼠胚胎神经干细胞.结果经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了重组GFP逆转录病毒,pLNCX2-GFP转染包装细胞后可以产生GFP逆转录病毒,病毒感染大鼠胚胎神经干细胞可以长期表达绿色荧光.结论逆转录病毒能够快速、稳定、长期地将GFP基因转入神经干细胞,这种标记方法非常有利于神经干细胞移植后结构和功能的研究。
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