【摘 要】
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乙酰胆碱酯酶(ACHE)是生物神经兴奋传导中的一种关键性酶.有机磷农药能够磷酰化AChE活性中心的丝氨酸羟基,导致神经传导阻断,因此AChE是有机磷农药残留检测的靶酶.文章选择鲫
【机 构】
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重庆医科大学基础医学院,浙江清华长三角研究院生态环境研究所,重庆理工大学化学与生物工程学院,清华大学环境科学与工程系
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乙酰胆碱酯酶(ACHE)是生物神经兴奋传导中的一种关键性酶.有机磷农药能够磷酰化AChE活性中心的丝氨酸羟基,导致神经传导阻断,因此AChE是有机磷农药残留检测的靶酶.文章选择鲫鱼脑作为酶源,对AChE提取方法进行了研究,并探讨了其对有机磷农药的敏感性.首先粗提AChE,通过正交试验确定了AChE酶活测定的最佳条件,研究了粗酶对几种有机磷农药的敏感陛及检测限,之后通过层析方法纯化AChE,得到高活性的目标酶.研究表明AChE活性测定最佳条件为:200mmol/L底物、pH 8.0、30℃水浴30min,这些因素对酶得活性影响顺序为:底物浓度＞pH＞温度＞时间,酶剂量对其影响最小;由鲫鱼脑粗提得到的AChE对4种有机磷农药的敏感性为:敌敌畏＞敌百虫＞氧乐果＞三唑磷＞辛硫磷＞乙酰甲胺磷;纯化后酶活达到了458.431xmol(min·mg),适合用于有机磷农药检测.
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