(1)目的探究人肝癌细胞HepG2最合适的培养方法。(2)方法对比复苏中先40℃水浴溶解后37℃温浴与37℃水浴溶解细胞的存活率,确定最佳复苏方法;对比采用一步消化法和分步消化法的细胞状态以选择最适传代消化方法;对比手动慢速冻存法、程序降温盒慢速冻存法与玻璃化冻存法冻存效果以选择合适冻存方法;对比刚复苏细胞用10%、12%、15%血清浓度DMEM培养液培养,确定其所需血清最适浓度。(3)结果复苏采用先40℃水浴溶解后37℃温浴,细胞平均存活率(81.0%)显然比37℃水浴溶解(69.3%)高;分步消化法效果比一步消化法效果好;冻存采用程序降温盒效果最佳,玻璃冻存法次之,手动慢速冻存效果最差;采用10%血清浓度的DMEM培养液培养刚复苏细胞增殖慢,死细胞多,12%血清浓度的死细胞少,但是增殖慢,而15%血清浓度的死细胞少且细胞增殖快。(4)结论HepG2细胞复苏采用先40℃水浴溶解后37℃温浴,消化传代用分步消化法,冻存用程序降温盒,-80℃冰箱过夜,随后液氮中保存;刚复苏的细胞采用血清含量为15%的DMEM培养液效果好。