【摘 要】
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目的研究缺血神经元轴突上的线粒体是否及如何被自噬清除。方法小鼠原代皮质神经元给予氧糖剥夺-复灌(OGD-Rep)处理,利用免疫荧光法观察轴突上线粒体数量的变化;利用微流体培
【基金项目】
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国家自然科学基金(81573406;81630098;81521062;81773703);浙江省自然科学基金(LR15H310001)
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目的研究缺血神经元轴突上的线粒体是否及如何被自噬清除。方法小鼠原代皮质神经元给予氧糖剥夺-复灌(OGD-Rep)处理,利用免疫荧光法观察轴突上线粒体数量的变化;利用微流体培养装置分离神经元轴突并对轴突线粒体进行特异性标记;利用活细胞共聚焦显微成像观察轴突线粒体的转运;最后利用电穿孔质粒转染法,在原代神经元中调控线粒体运动,观察其对线粒体自噬及缺血损伤的作用。结果 OGD-Rep处理诱导了原代神经元胞体及轴突上线粒体的丢失,但自噬相关基因Atg7的缺失仅能阻断胞体线粒体减少,提示缺血过程中轴突线粒体不在轴突原位被自噬清除。OGD-Rep增加了胞体内轴突来源的线粒体数量,并且这部分线粒体会与自噬泡及溶酶体发生共定位,提示缺血神经元轴突上的线粒体在胞体被自噬清除。相应地,OGD-Rep增加了轴突线粒体的逆向转运。高表达线粒体锚定蛋白Syntaphilin阻断线粒体逆向转运可逆转OGD-Rep诱导的线粒体自噬。反之,促进线粒体与逆向转运蛋白Dynein的结合可以进一步促进OGD-Rep诱导的线粒体逆向转运,并进一步促进线粒体自噬。结论缺血神经元轴突线粒体逆向转运回胞体后被自噬清除,进一步促进逆向转运可以促进线粒体自噬;相反,抑制线粒体逆向转运可抑制线粒体自噬。
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