基于宏基因策略的新颖木聚糖酶基因cbxynA克隆及其重组酶酶学性质

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研究构建了库容量约为1.3×10^4个克隆子且外源片段的总长为30Mb的土壤宏基因组文库。基于功能策略,从文库中筛选到分解木聚糖底物的阳性克隆子。该克隆经序列分析发现一个822bp的潜在的编码木聚糖酶基因(cbxynA)的开放阅读框,其编码的氨基酸序列与来自古细菌属编码的木聚糖酶的相似度最高仅为45%,说明该序列为一条未知的新序列。cbxynA在大肠杆菌中的重组表达产物的分子质量为29ku,与预测结果一致。对其原核表达条件进行优化,结果表明:质粒在培养5h后加入0.7mmol/LIPTG,23℃
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