【摘 要】
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目的 通过噬菌体展示技术，从骆驼外周血中筛选针对SARS-CoV-2 RBD结构域的特异性纳米抗体，并对纳米抗体的亲和力、结合表位和中和活性进行评估。方法 利用重组RBD免疫骆驼，从骆驼外周血中分离淋巴细胞，提取RNA并逆转录为cDNA，接着通过巢式PCR扩增VHH基因，电转化至pMECS噬菌粒载体中，构建噬菌体展示抗体库并进行免疫淘选，鉴定可以与RBD特异性结合的纳米抗体。分别利用Octet R
【基金项目】
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国家自然科学基金（82173731）；
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目的 通过噬菌体展示技术，从骆驼外周血中筛选针对SARS-CoV-2 RBD结构域的特异性纳米抗体，并对纳米抗体的亲和力、结合表位和中和活性进行评估。方法 利用重组RBD免疫骆驼，从骆驼外周血中分离淋巴细胞，提取RNA并逆转录为cDNA，接着通过巢式PCR扩增VHH基因，电转化至pMECS噬菌粒载体中，构建噬菌体展示抗体库并进行免疫淘选，鉴定可以与RBD特异性结合的纳米抗体。分别利用Octet Red96e和HPLC测定纳米抗体与重组RBD的亲和力和结合表位，通过SARS-CoV-2假病毒中和实验测定纳米抗体的中和活性。结果 从外周血淋巴细胞中成功扩增出VHH基因，构建的噬菌体展示抗体库库容为1.33×10~8CFU/ml；经过2轮免疫淘选，鉴定出2株特异性纳米抗体——NB2D11和NB4E9,KD值分别为2.21和0.31 nmol/L;NB2D11和NB4E9具有非竞争性的结合表位，中和SARS-CoV-2假病毒的IC50值分别为340.7和35.5 nmol/L。结论筛选到的2株高亲和力特异性纳米抗体可以有效地地阻断SARS-CoV-2假病毒与ACE2的结合，为COVID-19的诊断和治疗奠定了基础。
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