【摘 要】
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目的构建携带Tum-5基因真核表达载体PcDNA3.1-Tum-5。方法利用巢式PCR扩增人胚肾细胞株HEK293 cDNA获得Tum-5基因,并利用DNA回收试剂盒进行回收;同时扩增、提取pcDNA3.1质粒,
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目的构建携带Tum-5基因真核表达载体PcDNA3.1-Tum-5。方法利用巢式PCR扩增人胚肾细胞株HEK293 cDNA获得Tum-5基因,并利用DNA回收试剂盒进行回收;同时扩增、提取pcDNA3.1质粒,并将其与Tum-5基因分别进行EcoRV和XhoI双酶切,回收相应条带,通过T4DNA连接酶进行连接,转化DH5α感受态细胞,获得阳性克隆。获得质粒DNA后行KpnI和XhoI双酶切,克隆并测序酶切产物。结果巢式PCR扩增出的产物与目的基因大小相同;重组质粒经双酶切电泳分析,与预期结果一致;对连接
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