SpyTag/SpyCatcher环化技术是一种自发迅速的共价连接反应,通过环化蛋白的骨架以实现目标蛋白的环化,从而提高目标蛋白稳定性。研究显示,SpyTag/SpyCatcher技术介导的环化过程不受环境的影响,不会影响目标蛋白原本的催化活性和功能,且一旦完成便具有极强的稳定性。小泛素样修饰蛋白（small ubiquitin-like modifiers, SUMOs）是一种十分有效的促溶标签,广泛应用于重组蛋白的原核表达过程中。泛素样特异蛋白酶1 （ubiquitin-like-specific protease 1, Ulp1）是SUMO特异性蛋白酶中的一个重要成员,具有将SUMO从目标融合蛋白上切下,不残留任何氨基酸碱基的特异性酶切活性,且参与SUMO的成熟过程,但较差的稳定性限制了其应用。本研究使用截断型Ulp1 （Gly304～Lys621）代替全长Ulp1,并对其序列进行了优化,得到了重组截断型Ulp1。重组截断型Ulp1既具有Ulp1全部的酶活性,又能更好地在大肠杆菌（Escherichia coli）中高效表达。本研究设计并表达了重组截断型（recombinant truncated Ulp1-His6, rt Ulp1）、Spy Tag-rt Ulp1-Spy Catcher-His6 （crt Ulp1）和Spy-TagΔDA-rt Ulp1-Spy CatcherΔEQ-His6（lrt Ulp1）三种蛋白酶。综合比较3种蛋白酶的最适反应条件以及热稳定性,结果显示,crt Ulp1的最佳反应酶切温度比lrt Ulp1高10℃,比rt Ulp1高5℃。crt Ulp1在40℃条件下孵育2 h后仍保留87.3%的相对酶活,lrt Ulp1在40℃条件下孵育2 h后仍保留43.69%的相对酶活,而rt Ulp1几乎丧失了全部的酶活。且crt Ulp1在广泛的酸碱范围内都能保持较高的酶活,而rt Ulp1与lrt Ulp1只在其最佳反应p H下表现出较高的酶切活性。本研究利用Spy Tag/Spy Catcher技术获得了高稳定性的rt Ulp1,评价了环化结构对rt Ulp1热稳定性的影响以及Spy Tag/Spy Catcher技术对rt Ulp1热稳定性提高的效果,为获得具有高热稳定性的SUMOs特异性蛋白酶及促溶标签SUMOs的广泛使用提供技术基础。