【摘 要】
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文章利用绿色荧光蛋白基因作为报告基因,研究2个螺旋藻耐盐相关基因启动子区域的功能.通过启动子预测软件预测螺旋藻耐盐相关基因5’端非翻译区的启动子结构,用Primer3.0程序
【机 构】
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温州医学院检验医学与生命科学学院,温州医学院生物学实验教学中心
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文章利用绿色荧光蛋白基因作为报告基因,研究2个螺旋藻耐盐相关基因启动子区域的功能.通过启动子预测软件预测螺旋藻耐盐相关基因5’端非翻译区的启动子结构,用Primer3.0程序在线设计引物,以pMD18-T载体和pUC18载体克隆螺旋藻启动子序列、gfb和卡那霉素抗性基因,将螺旋藻启动子-GFP基因-卡那霉素抗性基因(pro-gfp-kanr)三联DNA片段克隆至pKW1188载体,并将该重组质粒pKWl 188::pro::gfp::kanr 转化至受体菌集胞藻6803,激光共聚焦显微镜观察不同盐浓度培养条件下、不同时间段集胞藻表达GFP的情况.结果显示,通过不同盐浓度和不同时间的诱导,2个螺旋藻启动子在0.4～0.6 mol/L NaC1条件下,培养6～8 h表达的绿色荧光蛋白最多.文章成功构建了以绿色荧光蛋白为报告基因、卡那霉素抗性基因为选择标记、集胞藻6803作为外源基因表达受体,进行螺旋藻耐盐相关基因功能研究的平台;另外,从螺旋藻启动子能被盐诱导大量表达GFP的结果看,与启动子相关的螺旋藻基因很可能与螺旋藻的耐盐性相关.
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