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黑茶加工中，大量微生物参与了渥堆发酵过程，导致产品中咖啡碱含量的明显增长。与植物体内合成路径不同，微生物体内合成咖啡碱存在一条以黄嘌呤为底物，利用鸟嘌呤脱氨酶催化鸟嘌呤生成黄嘌呤有效合成咖啡碱的新途径。为了克隆鸟嘌呤脱氨酶的基因，构建可高效合成黄嘌呤的原核表达载体并对外源蛋白活性进行检测，分别以酿酒酵母和大肠杆菌为研究材料，根据 Genbank 中酿酒酵母和大肠杆菌中鸟嘌呤脱氨酶基因 GUD1 和 EGUD 序列设计引物，PCR 特异扩增其基因片段，将目的基因连接至 p MAL-c5X载体，转入 E.coli BL21( DE3)中诱导蛋白表达，并用高效液相色谱法（HPLC）鉴定其目的蛋白的催化活性。结果表明重组载体 p MAL-GUD1，p MAL-EGUD 均可用来合成黄嘌呤，且 GUD1 比 EGUD 合成黄嘌呤的效率更高。研究结果将进一步丰富黑茶加工技术理论，同时为体外构建高效咖啡碱生物工程菌奠定基础。