以吉林长白山地区的野生大球盖菇为材料,对其进行1~5 h不同时间的晾晒处理,采用组织分离法分别对其菌盖、菌盖与菌柄交接处、菌柄上端和菌柄基部的组织进行分离纯化,通过测定菌丝生长速度、生长势和污染率等,筛选出分离纯化的最适晾晒时间和最佳部位;设置5种液体培养基配方培养液体菌种,通过测定菌丝体生物量、菌丝球密度和形态,筛选出最佳的液体培养基配方;最后将分离物进行ITS序列分析,计算遗传距离,并采用邻接法构建NJ系统发育树。结果表明,分离纯化最适晾晒时间为2 h,最佳分离部位为菌盖与菌柄交接处,此种情况下菌丝生长速度最快,菌丝长势最好,污染率最低;最佳的液体培养基配方为A2,菌丝体生物量最高,菌丝球密度最大,形态最好;最后分离菌株经ITS序列测定,系统发育分析证实其为大球盖菇。